焦磷酸测序法检测OCT4启动子在大鼠骨髓源性肝干细胞分化中的甲基化变化

发布时间：2017-05-28 14:08

  本文关键词：焦磷酸测序法检测OCT4启动子在大鼠骨髓源性肝干细胞分化中的甲基化变化，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：骨髓间充质干细胞具有分化成为肝细胞的潜能已得到证实,但其分化的调控机理还不完全清楚。通过检测大鼠骨髓源性肝干细胞(rat bone marrow-derived liver stem cells,RBMLSCs)诱导分化为肝细胞过程中OCT4启动子甲基化的变化,来探讨启动子甲基化调控细胞分化的机制。RBMLSCs用25μg/L重组人肝细胞生长因子和0.1 nmol/L地塞米松进行诱导,在诱导之后不同时间点(0 d,7 d,14 d)提取细胞的DNA及RNA。用荧光定量PCR法检测白蛋白(albumin,Alb)和OCT4的m RNA表达水平,应用焦磷酸测序法定量检测OCT4基因的启动子中4个Cp G位点的甲基化变化。结果表明:在RBMLSCs分化过程中,Alb m RNA持续增高(P0.05),但OCT4 m RNA表达在7 d及14 d明显减少(P0.005);同时OCT4启动子上游的Cp G 1-2-3甲基化频率显著上升(P0.001),但Cp G 4甲基化无明显变化。这些结果说明OCT4启动子高甲基化可能导致其m RNA表达减少,RBMLSCs多能性消失,但Cp G 4并不参与这一分化调控过程。
【作者单位】： 南方医科大学南方医院肝胆外科;
【关键词】： 大鼠骨髓源性肝干细胞 OCT 启动子甲基化 焦磷酸测序
【基金】：广东省科技计划项目(2010B080710169) 国家卫计委重点临床专科资助项目(W0211WAI44)
【分类号】：R329.2
【正文快照】： 干细胞在一定诱导条件下可分化为肝细胞、神经细胞、软骨细胞等多种成体细胞,具有多向分化潜能[1]。骨髓间充质干细胞是一类来源广泛的成体干细胞,分化为肝细胞的比例较高[2],有望成为终末期肝病的一种治疗手段。然而随着对骨髓间充质干细胞的深入研究,一些负面作用被发现,特

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本文编号：402797