缺氧调控表达的NT-3逆转录病毒载体的构建及鉴定

发布时间：2017-05-28 15:10

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【摘要】：目的构建与鉴定含有5个拷贝缺氧反应元件(five copies of hypoxia responsive elements,5HRE)的缺氧调控表达的神经营养因子-3(neurotrophin-3,NT-3)的逆转录病毒载体。方法用PCR、酶切和连接等分子克隆技术将5HRE和人来源NT-3片段克隆入逆转录病毒载体pLNCX中,构建重组逆转录病毒穿梭质粒pLNCX-5HRE-SV40-NT3-IRES-EGFP。经PT67包装细胞包装、高速离心纯化和浓缩等方法,获得逆转录病毒RV-5HRE-NT3;用逆转录病毒感染NIH 3T3细胞48h后,流式细胞仪检测并计算出病毒滴度。结果成功构建了重组逆转录病毒载体质粒pLNCX-5HRE-SV40-NT3-IRES-EGFP,并获得相应的逆转录病毒RV-5HRE-NT3,经过高速离心纯化和浓缩后,其滴度可达9.1×10~6 cfu/mL。结论成功构建了缺氧调控表达的NT-3逆转录病毒载体,为研究外源基因的缺氧调控特异性表达奠定了工作基础。
【作者单位】： 西安医学院人体解剖学教研室;西安交通大学医学部神经生物学研究所;青海大学医学院基础医学部解剖学教研室;
【关键词】： 逆转录病毒载体 缺氧调控表达 神经营养因子-
【基金】：国家自然科学基金资助项目(No.81301041) 陕西省青年科技新星项目(No.2015KJXX-43) 陕西省优势学科建设经费资助[No.陕教办(2014)3-1001] 陕西省教育厅专项科研计划项目(No.2013JK0756,14JK1614) 青海省应用基础研究资助项目(No.2013-Z-727)~~
【分类号】：R364.4
【正文快照】： 神经营养因子-3(neurotrophin-3,NT-3)是一种具有多功能的神经营养因子,除了具有维持神经元存活、诱导神经元分化和促进神经损伤修复的传统神经保护作用外,其还与血管发生密切相关,是治疗缺血性卒中的理想选择之一[1]。采用基因表达载体将NT-3导入脑组织或脑血管中,通过其在局

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1 张军峰;徐曦;;缺氧特异性调控基因表达在缺血性卒中治疗中的研究进展[J];神经损伤与功能重建;2015年05期

2 张军峰;史利利;张力;赵朝华;杨蓬勃;张建水;刘勇;徐曦;;低氧反应元件介导的低氧调控的神经营养因子-3表达上调减少低氧诱导的PC12细胞凋亡[J];解剖学报;2015年05期

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1 刘健;正、反义VEGF基因转染对人增生性瘢痕成纤维细胞增殖行为的影响[D];山东大学;2011年

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1 李锦华,廖晓星,陈永雄,张仕光,刘军;表达人白细胞介素10的逆转录病毒载体的构建[J];现代临床医学生物工程学杂志;1998年02期

2 张瑞萍;云琳;彭玲;陆斌;周倩;王皓;郭亚军;;高效转染人T细胞的逆转录病毒载体系统的构建及应用[J];细胞与分子免疫学杂志;2006年04期

3 徐学虎;全天一;曾伟霞;陈欣洁;李伟明;;miR-148a克隆及逆转录病毒载体构建[J];南方医科大学学报;2010年07期

4 郑翠侠;张晓娜;韩兵;宋怀东;马勤耘;;小鼠骨生成诱导因子基因逆转录病毒载体的构建及其在293T细胞中的表达[J];上海交通大学学报(医学版);2010年12期

5 杨建民,卢大儒,王健民,于敏,薛京伦,邱信芳,孟沛霖;携带人Ⅸ因子基因逆转录病毒载体的构建及其在小鼠骨髓细胞中的表达[J];中国实验血液学杂志;1998年02期

6 王健民,侯军;逆转录病毒载体中正向插入内含子片段对表达人凝血因子Ⅸ的作用[J];第二军医大学学报;2002年09期

7 王琳 ,陆荫英 ,成军 ,于敏,李克 ,刘妍;白细胞介素-18逆转录病毒载体的构建及抗乙型肝炎病毒的研究[J];解放军医学杂志;2002年08期

8 赵宁;郭中敏;陈系古;;pLXSN-EGFP逆转录病毒载体的构建及体内外表达的研究[J];热带医学杂志;2009年03期

9 杨毅力,赵小侠,龚春梅,侯云德;用逆转录病毒载体表达乙型肝炎病毒表面抗原[J];病毒学报;1992年03期

10 陈勇兵,陈如坤,陈力,吴明,施立,杨文涛,钱永跃;新型假型逆转录病毒载体的构建[J];江苏医药;2004年09期

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1 王子竹;王春生;张志人;朴善花;安铁洙;;小鼠L-Myc基因逆转录病毒载体的构建与检测[A];中国畜牧兽医学会动物解剖学及组织胚胎学分会第十七次学术研讨会论文集（下）[C];2012年

2 陈香梅;徐开林;潘秀英;李振宇;鹿群先;李德鹏;;携带绿色荧光蛋白基因的逆转录病毒载体的构建及其介导的T细胞基因转移研究[A];中华医学会第八次全国血液学学术会议论文汇编[C];2004年

3 陈香梅;徐开林;潘秀英;李振宇;鹿群先;李德鹏;;携带绿色荧光蛋白基因的逆转录病毒载体的构建及其介导的T细胞基因转移研究[A];2005年华东六省一市血液病学学术会议暨浙江省血液病学学术年会论文汇编[C];2005年

4 陈香梅;徐开林;潘秀英;李振宇;鹿群先;李德鹏;;携带绿色荧光蛋白基因的逆转录病毒载体的构建及其介导的T细胞基因转移研究[A];第10届全国实验血液学会议论文摘要汇编[C];2005年

5 邱婷婷;徐开林;潘秀英;李振宇;;PIG-A基因逆转录病毒载体的构建及表达[A];第12届全国实验血液学会议论文摘要[C];2009年

6 张秀亚;王珊;孔祥如;;携带MDR1基因的逆转录病毒载体的安全性研究[A];第八届全国儿童肿瘤学术会议论文汇编[C];2009年

7 高美华;石学香;李先平;张蓓;王秋波;王冰;;人CD59 RNAi逆转录病毒载体系统的构建与鉴定[A];第六届全国免疫学学术大会论文集[C];2008年

8 张志人;王春生;王子竹;朴善花;安铁洙;;小鼠microRNA367逆转录病毒载体的构建与检测[A];中国畜牧兽医学会动物解剖学及组织胚胎学分会第十七次学术研讨会论文集（下）[C];2012年

9 李江琪;郭坤元;杜江;李玉华;宋朝阳;;特异性造血细胞逆转录病毒载体pLNCD34X的构建及表达[A];第七届全国肿瘤生物治疗学术会议论文集[C];2001年

10 李俊刚;陈耀凯;王宇明;;可回复性永生化逆转录病毒载体phTERTGPlox的构建与表达[A];中华医学会第十二次全国病毒性肝炎及肝病学术会议论文汇编[C];2005年

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1 陆志城;基因疗法解禁有望[N];医药经济报;2003年

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1 惠宏襄;逆转录病毒载体表达的TGFα反义RNA对人脑胶质瘤细胞BT325的生长抑制和诱导分化作用[D];第四军医大学;1993年

2 王博蔚;多药耐药基因MDR1逆转录病毒载体的构建及其转染人胎盘源间充质干细胞的研究[D];吉林大学;2006年

3 邓盎;利用RNAi技术抑制ERβ表达对人成骨细胞株hFOB 1.19中TGF-β1和BMP-2表达的影响[D];中南大学;2011年

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1 李俊刚;人肝细胞可回复永生化逆转录病毒载体的初步研究[D];第三军医大学;2004年

2 曹靖;人前脑啡肽原基因逆转录病毒载体的构建及其表达[D];郑州大学;2006年

3 梁浩;融合表达人白细胞介素-2（hIL-2）和增强型绿色荧光蛋白（EGFP）的逆转录病毒载体的构建[D];内蒙古大学;2006年

4 许建;基于逆转录病毒载体的高效表达系统的建立和应用[D];中国人民解放军军事医学科学院;2008年

5 邓俊晖;人端粒酶逆转录酶基因启动子调控绿色荧光蛋白基因的逆转录病毒载体的构建[D];江西医学院;2005年

6 马骁;鸡RNAi逆转录病毒载体的构建及在BAF57基因功能研究中的初步应用[D];华中农业大学;2011年

7 孙淑红;应用siRNA特异沉默EBV潜伏期基因EBNA2表达的初步研究[D];青岛大学;2007年

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本文编号：402896