DLX1对BMP9诱导的间充质干细胞C3H10T1/2成骨分化的影响

发布时间：2025-02-15 11:11

　　 目的:分析和确认转录因子DLX1在骨形态发生蛋白9(bone morphogenetic protein 9,BMP9)诱导的间充质干细胞C3H10T1/2成骨分化中的作用。方法:首先,BMP9腺病毒感染C3H10T1/2细胞,RT-PCR和Western blot检测DLX1表达变化;随后,利用重组腺病毒技术分别过表达DLX1和RNA干扰(RNA Intenference,RNAi)抑制DLX1的表达,并利用碱性磷酸酶(Alkaline Phosphatase,ALP)染色、钙盐沉积实验(茜素红染色),免疫细胞化学检测骨钙素(osteocalcin,OCN)表达和裸鼠皮下异位成骨实验分析DLX1对于BMP9诱导的C3H10T1/2细胞成骨分化的影响。荧光素酶报告基因实验和Western blot分析DLX1对于BMP9诱导的C3H10T1/2细胞Smad1/5/8信号途径的影响。结果:BMP9可以促进C3H10T1/2细胞中DLX1基因和蛋白表达水平;过表达DLX1在体外可进一步促进BMP9诱导的C3H10T1/2细胞的ALP活性、钙盐沉积以及OCN的表达,过表达DLX1亦可促进BM...

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 细胞培养
        1.2.2 细胞总RNA的提取和RT-PCR
        1.2.3 ALP活性测定
        1.2.4 钙盐沉积实验
        1.2.5 Western blot
        1.2.6 免疫细胞化学
        1.2.7 荧光素酶报告基因实验
        1.2.8 动物实验和组织化学染色
        1.2.9 统计分析
2 结果
    2.1 BMP9促进C3H10T1/2细胞中DLX1的表达
    2.2 过表达DLX1可促进BMP9诱导的C3H10T1/2细胞成骨分化
    2.3 RNAi抑制DLX1可减弱BMP9诱导的C3H10T1/2细胞成骨分化
    2.4 DLX1可影响BMP9诱导的C3H10T1/2细胞在裸鼠皮下异位成骨
    2.5 DLX1可影响BMP9诱导的Smad1/5/8信号的活化
3 讨论



本文编号：4034218