Cathepsin V作为保护组织损伤/抗炎新型靶点的前期机制

发布时间：2025-03-30 03:47

　　背景：胞外的双硫键HMGB1(高迁移率族蛋白B1)是一种关键的损伤相关模式分子DAMP,在众多急慢性疾病中,通过细胞表面Toll样受体4(TLR4)介导病理性炎症：HMGB1-TLR4信号通路的特异性抑制剂可以选择性阻断内源性炎症激活的早期事件,为相关炎症性疾病提供新的治疗药物。基于HMGB1-TLR4-TNF-α信号轴的细胞高通量筛选发现,第一代HIV蛋白酶抑制剂Saquinavir (SQV)可有效阻断HMGB1-TLR4激活后的炎症因子(TNF-a和IL-6)释放。我们前期实验发现SQV预处理能显著减轻肝脏热缺血再灌注模型(Liver Ischemia/Reperfusion Injury, IR)的肝损伤,而HMGB1-TLR4信号通路正是Liver IR模型的核心通路之一,同时鉴定到半胱氨酸蛋白酶V (Cathepsin V,CTSV)是SQV的哺乳动物靶点之一。而细胞实验与体外重组蛋白实验均证实CTSV与TLR4存在相互作用且可被SQV阻断,CTSV低表达致使HMGB1-TLR4激活受限,揭示CTSV在TLR4信号通路中的未知作用,提示SQV通过靶向CTSV而干预HMGB1-...

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【学位级别】：博士

【部分图文】：

图2-1基于Biacore的HMGBl与MD2结合分析

细胞释放炎症因子[20]。基于这一理论，我们利用Biacore蛋白相互作用分析技术，评估SQV对HMGB1与MD2结合的影响。图2-1示，320秒左右，HMGB1与MD2结合达到峰值（黑线）；而添加1mM（SQV:HMGB1=100:1）的SQV对结合曲线无影响（蓝线....

图2-2LPS引起的TLR4受体二聚化被SQV阻断

八年制博士学位论文 SQV对TLR4信号通路早期事件的影响LPS刺激如前。通过免疫共沉淀技术（IPHA，IBMyc)观察TLR4二聚化程度。对照组中，LPS刺激30分钟明显增强了TLR4二聚化，而60分钟时二聚化己经回复至初始水平，然而SQV预处理组中LPS刺激30分钟....

图2-3SQV阻断TLR4募集MyD88

SQV阻断TLR4募集MyD88。用SQV（30^iM）或OPTIMEM预处理PM-1巨嘆细胞1小时，随后加入HMGBl（2.5ng/ml）刺激30、60分钟。用体免疫共沉淀细胞裂解液，之后免疫印迹检测共沉淀蛋白中MyD88和TLR平。研究结果来自3次独立....

图2-4HMGBl引起的IRAK4难酸化和IRAKI降解被SQV抑制

图2-3SQV阻断TLR4募集MyD88。用SQV(30^iM)或OPTIMEM预处理PMA诱导的人THP-1巨嘆细胞1小时，随后加入HMGBl(2.5ng/ml)刺激30、60分钟。用兔抗人MyD88抗体免疫共沉淀细胞裂解液，之后免疫印迹检测共沉淀蛋....

本文编号：4038144