伤寒沙门菌线性质粒pBSSB1基因的相关功能研究

发布时间：2025-04-23 05:53

　　目的:自在原核生物中发现线性质粒以来,对于线性质粒的探索一度成为原核生物研究的热点,其作为独立于染色体基因组外的遗传单位,在细菌耐药性及致病方面发挥了重要作用。质粒p BSSB1是目前为止在伤寒沙门菌(Salmonella enterica serovar Typhi,S.Typhi)中发现的唯一的一种线性质粒。本课题组对线性质粒p BSSB1其上两个基因的功能展开研究,进一步探索该线性质粒在伤寒沙门菌中所发挥的作用。方法:1.伤寒沙门菌LP002、LP008基因高表达菌株、缺陷株及异源表达菌株的构建。构建p BAD-LP008重组载体,鉴定正确后,用阳性重组质粒和空质粒电击转化伤寒沙门菌野生株(S.Typhi GIFU10007),作为LP008基因高表达菌株(WT-LP008)和空质粒对照株(WT-p BAD);阳性质粒及空载体电转化S.Typhi Ty2感受态作为LP008基因异源表达株(Ty2-LP008)及异源表达对照株(Ty2-p BAD)。LP008及LP002基因缺陷株的制备则是将同源重组片段连接于自杀质粒p GMB151,将阳性质粒电击转化入野生株后利用蔗糖平板筛选最终...

【文章页数】：81 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
英文缩写索引
1 绪论
    1.1 伤寒沙门菌简介
    1.2 原核生物线性质粒的发现及作用
    1.3 线性质粒pBSSB1的研究现状
    1.4 本论文研究内容
2 研究目的、技术路线、材料方法
    2.1 研究目的
    2.2 技术路线
        2.2.1 LP008、LP002基因功能的初步预测
        2.2.2 LP008基因研究技术路线
        2.2.3 LP002基因研究技术路线
    2.3 实验材料
        2.3.1 菌株和质粒
        2.3.2 主要试剂和材料
        2.3.3 主要溶液
        2.3.4 主要仪器
    2.4 实验方法
        2.4.1 伤寒沙门菌LP008、LP002蛋白结构域预测
        2.4.2 伤寒沙门菌LP008基因相关实验方法
            2.4.2.1 伤寒沙门菌LP008基因相关菌株的构建
            2.4.2.2 LP008基因高表达菌株的生长曲线测定
            2.4.2.3 LP008基因高表达菌株的动力试验
            2.4.2.4 LP008基因高表达菌株的生物膜试验
            2.4.2.5 LP008基因高表达菌株的上皮细胞侵袭试验
            2.4.2.6 LP008基因高表达菌株的qRT-PCR
            2.4.2.7 LP008重组蛋白的纯化及获取
            2.4.2.8 凝胶阻滞试验
            2.4.2.9 基因芯片
        2.4.3 伤寒沙门菌LP002基因相关实验方法
            2.4.3.1 LP002缺陷变异株的构建
            2.4.3.2 LP002缺陷株的生长曲线测定
            2.4.3.3 LP002缺陷株的动力试验
            2.4.3.4 LP002缺陷株的上皮细胞侵袭试验
            2.4.3.5 LP002缺陷株的巨噬细胞胞内试验
3 实验结果
    3.1 伤寒沙门菌LP008、LP002蛋白结构域预测
    3.2 伤寒沙门菌LP008基因相关实验结果
        3.2.1 伤寒沙门菌LP008基因相关菌株的构建
        3.2.2 LP008基因对生长情况的影响
        3.2.3 LP008基因高表达菌株的动力试验
        3.2.4 LP008基因高表达菌株的生物膜试验
        3.2.5 LP008基因高表达菌株的上皮细胞侵袭试验
        3.2.6 LP008基因高表达菌株的qRT-PCR
        3.2.7 LP008重组蛋白的纯化及获取
        3.2.8 凝胶阻滞试验
        3.2.9 基因芯片
    3.3 伤寒沙门菌LP002基因相关实验结果
        3.3.1 LP002缺陷变异株的构建
        3.3.2 LP002基因对生长情况的影响
        3.3.3 LP002基因缺陷变异株的动力试验
        3.3.4 LP002基因缺陷变异株的上皮细胞侵袭试验
        3.3.5 LP002基因缺陷变异株的巨噬细胞胞内存活试验
4 讨论
    4.1 LP008基因功能
        4.1.1 LP008基因对S. Typhi动力、生物膜、侵袭力的调节
        4.1.2 LP008基因调控机制
    4.2 LP002基因功能
5 主要结论及展望
    5.1 主要结论
    5.2 展望
参考文献
致谢
攻读硕士学位期间发表论文及学术交流



本文编号：4041324