SUN5特异性抗体的制备及其应用

发布时间：2017-05-29 06:13

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【摘要】：目的制备可检测全长SUN5的特异性抗体,并用该抗体检测SUN5蛋白在人类生殖细胞中的表达。方法通过生物信息学比较SUN5与新剪切体SUN5β之间的差异,在差异区域设计合成短肽,制备SUN5多克隆抗体并纯化。用新制备的SUN5抗体对Ntera-2细胞中的SUN5蛋白进行Western blotting和免疫荧光检测,验证抗体的特异性;最后,用该抗体对人睾丸细胞涂片进行检测,观察SUN5蛋白在人生殖细胞中的表达。结果成功合成了SUN5短肽,而且用该短肽制备了SUN5多克隆抗体。Western blot结果显示,新制备的SUN5特异性抗体可检测到全长SUN5蛋白。免疫荧光实验结果表明,在Ntera-2细胞中SUN5蛋白定位在核膜和胞浆。通过对人睾丸细胞涂片的检测发现,SUN5在睾丸精母细胞、圆形精子细胞及精子中均有表达。结论成功制备了SUN5特异性抗体,该特异性抗体的制备对于深入研究SUN5的功能具有重要的意义。此外,发现SUN5蛋白在精母细胞、圆形精子细胞及精子中均有表达,提示SUN5蛋白可能在精子发生中发挥着重要的生理功能。
【作者单位】： 中南大学湘雅三医院医学实验中心;中南大学湘雅三医院检验科;
【关键词】： SUN 抗体 Western blot 免疫荧光 生殖细胞
【基金】：国家自然科学基金(81170615)~~
【分类号】：R392
【正文快照】： SUN蛋白是一类含有SUN结构域蛋白的总称,目前发现的SUN蛋白有:SUN1、SUN2、SUN3、SUN4(又称SPAG4)和SUN5(又称SPAG4L或TSARG4)[1]。通过对广谱性表达的SUN1和SUN2的研究发现,SUN蛋白可通过其SUN domain与带有KASH domain的蛋白相互作用(如:Nesprin-2,Nesprin-3等),形成复合物,

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前5条

1 杨梦;左笑丛;李艳;黄利华;邢晓为;;一种小鼠睾丸细胞涂片的快速制备方法[J];细胞与分子免疫学杂志;2014年02期

2 何胜平;陈雅华;赵瑛瑛;王继德;白杨;;肝螺杆菌甲基基团趋化信号转导蛋白多克隆抗体的制备及鉴定[J];南方医科大学学报;2013年09期

3 郭睿;李喜霞;王惠珍;;小鼠睾丸特异基因在生精细胞中阶段性表达的定量分析[J];动物学杂志;2009年01期

4 ;Identification of a Novel Gene SRG4 Expressed at Specific Stages of Mouse Spermatogenesis[J];Acta Biochimica et Biophysica Sinica;2004年05期

5 邢晓为,李麓芸,傅俊江,朱文兵,刘刚,刘上峰,卢光t;人类生精相关基因TSARG4的cDNA克隆[J];生物化学与生物物理学报;2003年03期

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 王静芳;黄利华;伍勇;杨林飞;任瑶;邢晓为;;SUN5特异性抗体的制备及其应用[J];南方医科大学学报;2016年05期

2 曾娇辉;伍勇;蒋金泉;王静芳;邢晓为;;Nesprin2在小鼠睾丸各级生精细胞中的表达及其原核表达与纯化[J];现代生物医学进展;2015年16期

3 张帅;张燕;高青;王秀革;鞠志花;王长法;;过渡蛋白及其与动物雄性繁殖的研究进展[J];中国畜牧杂志;2014年23期

4 胡守奎;徐建国;;螺杆菌属及其致病性研究[J];疾病监测;2014年04期

5 陈颜亮;郑治;王剑龙;周晓哲;李艳;杨梦;黄利华;邢晓为;;带Myc、His标签的SPAG4L真核表达载体的构建与表达[J];生物工程学报;2013年11期

6 龚梦嘉;周建武;毕杨;;AP2α荧光素酶报告基因的构建及在BMPs诱导成骨分化研究中的应用[J];南方医科大学学报;2013年11期

7 韦新兰;张杰;陈丽萍;王卫民;高泽霞;王焕岭;;团头鲂SPATA4基因的分子克隆及表达分析[J];华中农业大学学报;2013年03期

8 吕文强;师润;陈陆;张金来;杨霞;赵军;王新卫;王川庆;;雏鸡肠组织中CD44的鉴定及时空表达特性[J];中国兽医学报;2013年01期

9 蒋先镇;杨明刚;邢晓为;;人睾丸新基因SPAG4L的原核表达与纯化[J];南方医科大学学报;2010年09期

10 邢晓为;李昌琪;张建伟;;SPAG4L在人类睾丸中的表达研究[J];现代生物医学进展;2010年13期

【二级参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 汪虹英;蔡欣;;小鼠初级精母细胞减数分裂前期联会复合体观察[J];西北农林科技大学学报(自然科学版);2012年06期

2 ;The expression and localization of a novel protein phosphatase inhibitor 2810408A11Rik in mouse testis and sperm[J];Journal of Biomedical Research;2012年02期

3 付俊;缪时英;;小鼠睾丸曲细精管生精上皮的分离及形态观察[J];中国医学科学院学报;2011年06期

4 蔡欣;;标记减数分裂遗传重组的免疫荧光染色方法[J];中国生物化学与分子生物学报;2010年11期

5 牛凌云;夏国盛;李菁;郭蒸;秦和平;王继德;白杨;;肝螺杆菌甲基基团接受趋化信号转导蛋白的克隆表达及纯化[J];胃肠病学和肝病学杂志;2009年10期

6 杨幼波;向红;邢晓为;;人TSARG4真核表达载体的构建及稳定转染HeLa细胞系的建立[J];细胞与分子免疫学杂志;2009年08期

7 郭睿;闫萍;李喜霞;张栋;;小鼠精子细胞变态成形过程中manchette的免疫荧光染色分析[J];解剖学报;2008年06期

8 李菁;林焕健;姜泊;白杨;张弟;张亚历;王继德;;我国首株肝螺杆菌的分离培养与鉴定[J];南方医科大学学报;2008年05期

9 苏爱;刘金成;王振华;王培林;;小鼠睾丸生殖细胞减数分裂标本制作方法的改进[J];青岛大学医学院学报;2006年04期

10 傅俊江,卢光t,李麓芸,刘刚,邢晓为,刘上峰;睾丸生精细胞凋亡相关基因TSARG1与Mtsarg1的分子克隆及Mtsarg1基因的表达谱分析[J];遗传学报;2003年01期

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本文编号：404327