卡波氏肉瘤病毒K9基因重组慢病毒表达载体的构建及其编码蛋白功能初探

发布时间：2017-06-06 01:04

  本文关键词：卡波氏肉瘤病毒K9基因重组慢病毒表达载体的构建及其编码蛋白功能初探，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:构建卡波氏肉瘤病毒(Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus,KSHV)K9基因的重组慢病毒载体,并探究K9基因编码的病毒干扰素调节因子1(viral IFN regulatory factor 1,v IRF1)对人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)增殖的影响。方法:根据K9基因的核酸序列设计聚合酶链式反应(PCR)的上下游引物。以实验室已有的真核表达载体p CI-K9-Flag为模板,PCR扩增K9基因序列。PCR产物经限制性内切酶双酶切后插入慢病毒载体p HAGE-CMVMCS-Izs-Green(简称p HAGE)中,构建重组慢病毒质粒p HAGE-K9。将p HAGE-K9质粒与包膜质粒p MD2.G、包装质粒ps PAX2共同转染人胚肾上皮细胞(293 T细胞),包装K9基因的重组慢病毒。采用病毒梯度稀释法测定病毒滴度。慢病毒感染HUVECs后,观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达,蛋白质印迹法检测HUVECs中K9编码的v IRF1蛋白的表达。采用流式分选技术获得稳定表达v IRF1蛋白的HUVECs。运用细胞增殖实验检测v IRF1对HUVECs增殖的影响。结果:核酸序列测定结果表明,重组慢病毒质粒p HAGE-K9构建成功。蛋白质印迹结果显示,K9基因重组慢病毒感染HUVECs后其编码蛋白成功表达。细胞增殖实验结果表明,稳定表达v IRF1的HUVECs增殖能力显著强于对照组。结论:KSHV K9基因编码的v IRF1能够促进HUVECs的增殖。
【作者单位】： 南京医科大学病原生物学系;
【关键词】： 卡波氏肉瘤病毒 K基因 病毒干扰素调节因子 慢病毒 人脐静脉血管内皮细胞 细胞增殖
【基金】：国家自然科学基金资助项目(81571984)
【分类号】：R373.11
【正文快照】： 卡波氏肉瘤病毒(Kaposi's sarcoma-associatedherpesvirus,KSHV)又称人疱疹病毒8型(humanherpesvirus 8,HHV-8),是一种γ-2型疱疹病毒,已被证实是卡波氏肉瘤的病原体[1]。卡波氏肉瘤组织中分布有大量的梭形细胞(其前体为内皮细胞)和异常增生的新生血管,并存在炎性细胞浸润[2]

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本文编号：425007