低氧与低氧模拟剂对BMSCs成骨分化影响的对比研究

发布时间：2017-06-06 13:22

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【摘要】：目的对比低氧培养与常氧条件下低氧模拟剂二甲基乙二酰基甘氨酸(dimethyloxalylglycine,DMOG)对小鼠BMSCs成骨分化的影响。方法原代分离培养健康3~4周龄昆明小鼠BMSCs,采用流式细胞术对细胞CD29、CD44、CD90、CD34表面标志进行检测,行成骨、成脂、成软骨诱导分化染色鉴定。取第3代BMSCs分为对照组(A组,常氧条件下培养)、低氧培养组(B组,1%O2低氧条件下培养)及DMOG干预组(C组,常氧条件下加入0.5 mmol/L DMOG培养)。分别于培养1、2、3、4 d采用MTT法检测BMSCs增殖情况,7、14 d检测ALP含量,24 h后采用Western blot法检测低氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor,HIF-1α)蛋白表达,3、7 d采用实时荧光定量PCR检测RUNX2、Osterix基因表达,21 d行茜素红染色观察。结果 BMSCs流式细胞术表面标志鉴定示CD29(+)、CD44(+)、CD90(+)、CD34(-);成骨、成脂、成软骨诱导分化后茜素红染色、油红O染色及甲苯胺蓝染色均呈阳性。MTT法检测示,培养1 d,3组细胞增殖比较差异无统计学意义(P0.05);2、3、4 d,与A组比较,C组均抑制细胞增殖,但差异无统计学意义(P0.05);而B组则促进细胞增殖,差异有统计学意义(P0.05)。培养各时间点,B、C组ALP含量、HIF-1α蛋白相对表达量及RUNX2、Osterix基因相对表达量均显著高于A组,ALP含量及RUNX2、Osterix基因相对表达量C组高于B组,而HIF-1α蛋白相对表达量B组高于C组,差异均有统计学意义(P0.05)。培养21 d茜素红染色示,A组可见少许结节状红染物质,B组可见中等量红染物质,而C组可见大量红染物质。结论低氧能明显促进BMSCs增殖,DMOG对BMSCs增殖无明显影响;低氧与DMOG均能促进BMSCs成骨分化,且DMOG促BMSCs成骨分化能力更强。
【作者单位】： 云南省第一人民医院康复医学科;昆明医科大学第一附属医院骨科;昆明医科大学第一附属医院神经外二科;
【关键词】： 低氧 低氧模拟剂 二甲基乙二酰基甘氨酸 成骨分化 小鼠
【基金】：云南省卫计委科研基金资助项目(2011WS0033) 西南医科大学校内基金资助项目(15041)~~
【分类号】：R364.4
【正文快照】： 低氧诱导因子(hypoxia inducible factor,HIF)介导低氧适应性反应,其可调控一系列转录因子和下游基因表达,在细胞低氧反应中发挥重要调控作用[1]。不少研究表明稳定HIF蛋白能够促进干细胞成骨分化[2-4],但也有研究报道其能抑制干细胞成骨分化[5-7]。稳定HIF蛋白,可通过降低细

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本文编号：426512