启动子荧光素酶报告系统检测低浓度过氧化氢激活神经肽PACAP特异受体PAC1-R启动子的作用

发布时间：2017-06-07 01:08

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【摘要】：垂体腺苷酸环化酶激活多肽(pituitary adenylate cyclase-activating polypeptide,PACAP)特异受体PAC1-R(PACAP receptor 1)是神经系统疾病药物开发的重要靶点。为了研究其表达的生物学机制,本研究克隆了PAC1-R基因转录起始位点上游从-2 500到+26的2 526 bp启动子片段,构建PAC1-R启动子驱动的荧光素酶基因报告载体p GL3-PAC1-Rp,并确证PAC1-R启动子荧光素酶报告系统在小鼠脑神经瘤细胞Neuro-2a和人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y中工作正常。运用此PAC1-R启动子荧光素酶报告系统,首次发现低浓度过氧化氢(hydrogen peroxide,H_2O_2)有效激活PAC1-R启动子,此作用可被转录因子特化蛋白1(specificity protein 1,SP1)抑制剂光神霉素A(mithramycin A)所抑制,提示SP1参与介导H_2O_2对PAC1-R启动子的激活作用。生物信息学分析显示,PAC1-R启动子含有多个SP1结合位点。PAC1-R启动子的荧光素酶报告系统的构建为深入探索PAC1-R高表达的作用与机制奠定了基础,低浓度H_2O_2对PAC1-R启动子激活作用的发现有助于深入诠释低浓度活性氧的生理学作用。
【作者单位】： 暨南大学生物医药研究院;
【关键词】： PACAP受体 启动子 荧光素酶报告系统 过氧化氢(HO) 特化蛋白(SP)
【基金】：国家自然科学基金项目(No.31100545) 广东省自然科学基金项目(No.2016A030313087)资助~~
【分类号】：R363
【正文快照】： *联系人Tel:020-38896770;E-mail:tyrj@jnu.edu.cnReceived:May 10,2016;Revised:June 14,2016;Accepted:June 16,2016Supported by National Natural Science Foundation of China(No.30471975);Natural Science Foundation of Guangdong Province(No.2016A030313087)*Corres

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本文编号：427873