医学论文论真菌感染实验室诊断技术进展(2)

　　BG可用于早期发现深部真菌感染，但不能区分是何种真菌感染，另外新生隐球菌感染并不能在血及脑脊液中测到BG，接合菌属如毛霉菌和根霉菌由于细胞壁缺乏(1—3)一B—D一葡聚糖，所引起的感染也无法检测。所以提倡将BG检测和GM检测联合起来，可以增加诊断的敏感性。

　　随着质谱分析技术的不断进展，血清真菌代谢产物检测也得到迅速发展。真菌代谢产物主要包括D一阿拉伯醇、L一阿拉伯醇和甘露聚醇。采用酶荧光法检测血、尿标本D一阿拉伯糖醇／肌酐比值或GC—MS法检测血、尿标本D一阿拉伯糖醇／L一阿拉伯糖醇比值，可快速预测系统性念珠菌感染，但由于不能发现不产生D一阿拉伯糖醇的克柔念珠菌、光滑念珠菌和新生隐球菌等三种真菌，目前很难在临床实验室应用。快速发展起来的质谱分析技术不仅用于真菌感染的诊断检测，也广泛应用于真菌毒素的检测。Jegorov A等 使用质谱分析，根据特异真菌代谢产物快速地鉴定4O多个不同真菌菌株。但由于检测费用的原因，质谱分析目前并不能在临床实验室广泛应用。

　　4 分子生物学方法近年来，分子生物学技术已成功地应用于某些深部真菌感染的诊断以及耐药基因的检测。分子生物学主要以聚合酶链反应(plymerase chain reaction，PCR)技术为基础的一系列分子诊  断方法，通常先采用真菌通用引物对待检标本进行扩增，然后再采用属或种特异性引物对扩增产物进行二次扩增，即将DNA放大数百万倍后再进行测定，所以远比培养法敏感，可以简便、快速地鉴定多种医学重要真菌，广泛应用于病原真菌的分型、鉴定和亲缘关系的研究。PCR技术的应用是目前真菌感染诊断中最活跃的领域。

　　由于白念珠菌和曲霉菌是临床常见感染真菌，其分子生物学诊断研究进展也比较快，目前主要有基于白念珠菌ITS、rD—NA、IGS基因保守区的普通PCR、PCR—RFLP、RAPD、Real—time—PCR及针对胞外抗原基因的EIA、PCR—EIA等。其中聚合酶链反应单链构象多肽性分析(PCR—SSCP)可将曲霉鉴定到属的水平，并可一次性对烟曲霉和黄曲霉进行鉴别。随机扩增多肽性DNA(RAPD)分析通过扩增靶核苷酸细胞DNA，经凝胶电泳进行DNA片断大小及数量的多肽性分析，已应用于酵母菌及曲霉菌的鉴定、分类和流行病学研究，方法简便可以大规模使用，但重复性相对较差，常采用多种随机引物进行PCR扩增和与其他方法联合应用，提高稳定性 。限制性片段长度多态性分析(PCR—RFLP)利用不同种属的真菌基因组DNA顺序存在差异，使用核酸限制性内切酶识别双链DNA中特定碱基顺序的核酸水解酶，酶切后产生的特异DNA片段经琼脂糖凝胶电泳形成酶切图谱，借此可对相近菌种或同种内变种进行分析。实时荧光定量PCR(real—time—PCR)技术即在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析，可对临床重要曲霉菌和念珠菌进行区分 。巢式PCR是一种变异的聚合酶链反应(PCR)，使用两对(而非一对)PCR引物扩增完整的片段，其敏感性比普通PCR要高1000倍。Pongpom等 应用巢式PCR检测血清中的马尔尼菲青霉菌DNA，检测敏感度100％，特异性达到68．6％。赵军等采用自行设计的烟曲霉特异性引物用巢氏PCR技术快速诊断侵袭性烟曲霉感染，在临床确诊或拟诊的侵袭性曲霉感染患者中，检测灵敏度和特异性分别达到100％和83．3％。而在曲霉菌感染的分子生物学诊断方面，基于核酸水平的普通PCR、两步PCR、实时PCR和基于表面抗原的ELISA免疫印迹等技术，笔耕文化推荐期刊，以其特异性强、灵敏度高等特点在曲霉病的诊断及分型中发挥着日趋重要的作用。

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