MSX2对人胎盘滋养层细胞侵袭能力的影响及机理研究

发布时间：2017-06-20 08:06

  本文关键词：MSX2对人胎盘滋养层细胞侵袭能力的影响及机理研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：背景:成功的胚胎植入取决于滋养层细胞的正常分化和适度侵袭。滋养层侵袭不足将导致妊娠相关疾病,如早期流产、先兆子痫等。MSX2(Msh Homeobox 2),MSX同源框蛋白家族的一个成员,在哺乳动物的许多细胞和组织,如牙齿、软骨,和许多外胚层器官的生长和分化过程中充当着关键角色。最近的研究发现,MSX2可以通过激活癌细胞的EMT进程,进而促进其向临近组织侵袭及迁移。然而,MSX2在胎盘滋养层的侵袭行为中是否扮演角色,还有待探索。目的:以不同时期人胎盘绒毛组织及人滋养层细胞系作为研究对象,研究MSX2对人胎盘滋养层细胞侵袭行为的影响及其机制。方法:1.用免疫组织化学方法检测MSX2在不同时期的人胎盘绒毛滋养层细胞的表达。2.用Western Blotting方法检测MSX2在HTR8/SVneo,JEG-3,JAR和BeWo四种人滋养层细胞中的表达。3.对人正常滋养层细胞系HTR8/SVneo转染MSX2过表达质粒或特异性的MSX2-si RNA后,运用细胞侵袭实验(Matrigel invasion assay)检测MSX2对滋养层细胞侵袭能力的影响,随后收集上清液和细胞,分别用明胶酶谱法和Western Blotting方法检测基质金属蛋白酶Pro-MMP-2,-9和MMP-2,-9的表达。4.在正常滋养层细胞系HTR8/SVneo及绒毛膜癌细胞系JEG-3中过表达或干扰MSX2后,收集细胞RNA或者蛋白,用qRT-PCR和(或)Western Blotting方法检测与EMT及侵袭相关因子E-cadherin,vimentin和β-catenin的表达。5.用免疫组织化学及Western Blotting方法对比检测MSX2在人正常足月胎盘和先兆子痫胎盘滋养层细胞中的表达。结果:1.MSX2蛋白表达在整个妊娠时期人胎盘的细胞滋养层,合胞体滋养层和绒毛外滋养层细胞中,且在HTR8/SVneo,JEG-3,JAR和BeWo四种人滋养层细胞中也均有表达。2.HTR8/SVneo细胞转染MSX2过表达质粒后,该细胞在体外的侵袭能力得到了提升(271±45vs.443±75,P0.05),并且伴随着基质金属酶-2(MMP-2),vimentin和β-catenin的表达升高(P0.05)。转染MSX2-siRNA后,结果与之相反。然而,不管是转染MSX2过表达质粒还是MSX2-siRNA,都只影响β-catenin的蛋白水平,而不影响其mRNA水平。同时,在JEG-3细胞中过表达MSX2,导致E-cadherin的表达降低(P0.05),而转染MSX2-si RNA,导致E-cadherin的表达升高(P0.05)。3.在人先兆子痫胎盘绒毛中,MSX2的蛋白表达水平比正常足月胎盘显著降低(P0.05)。结论:MSX2能增强人滋养细胞的侵袭能力,其可能机制是通过激活经典Wnt信号进而促进EMT,且MSX2表达的异常可能与先兆子痫的发生相关。
【关键词】：MSX2 滋养层细胞 侵袭 EMT 先兆子痫
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R321
【目录】：

• 英汉缩略语名词对照4-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-11
• 前言11-13
• 第一部分 MSX2在不同时期人胎盘绒毛及不同人滋养层细胞系的表达13-20
• 1 材料与方法13-16
• 2 实验结果16-20
• 第二部分 MSX2对人正常滋养层细胞系HTR8/SVneo侵袭能力的影响20-38
• 1 材料和方法20-25
• 2 实验结果25-38
• 第三部分 MSX2在先兆子痫胎盘和正常胎盘中的表达对比38-41
• 1 材料和方法38
• 2 实验结果38-41
• 讨论41-44
• 全文总结44-45
• 附件45-47
• 参考文献47-51
• 文献综述51-60
• 参考文献56-60
• 致谢60-61
• 攻读学位期间的研究成果及发表的学位论文目录61

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本文编号：464943