IL-33蛋白及抗IL-33全人源单链抗体的表达、纯化及鉴定

发布时间：2017-06-28 13:18

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【摘要】：目的表达IL-33蛋白及抗IL-33全人源天然单链抗体并进行纯化及鉴定。方法前期采用噬菌体展示技术从文库容量为108的全人源天然抗体文库筛选了抗IL-33全人源单链抗体,并将筛选的抗IL-33基因转入表达载体p LY16中。在前期工作的基础上,进行了以下研究:表达并纯化人IL-33蛋白,将构建的IL-33/PET102/D-TOPO质粒转化到大肠杆菌BL21中,表达后用Ni-NTA树脂纯化、浓缩再进行SDS-PGE电泳和Western blot验证。将抗IL-33 sc Fv/p LY16重组质粒转化入大肠杆菌DH5αF’中,应用PCR技术挑选阳性克隆并进行验证,IPTG诱导可溶性表达,Ni-NTA树脂纯化,SDS-PGE电泳和Western blot验证。结果 IL-33/PET102/D-TOPO质粒测序结果显示,插入的外源基因为人全长IL-33 c DNA。表达的IL-33融合蛋白相对分子质量为45 000左右。Western blot结果显示表达的蛋白为人IL-33蛋白。对从天然抗体文库中筛选的抗IL-33单链抗体进行测序,结果显示序列大小为750 bp左右,为开放阅读框,各序列之间有个别氨基酸的差异,说明为不同的单链抗体。ELISA结果显示抗IL-33单链抗体与IL-33有一定的结合能力。Western blot结果证实,表达的抗体为抗IL-33抗体。结论成功表达并纯化了IL-33抗原、抗IL-33全人源天然单链抗体。
【作者单位】： 西南医科大学基础医学院免疫学教研室;西南医科大学附属口腔医院第二门诊;
【关键词】： IL- 全人源单链抗体 表达
【基金】：四川省科技厅项目(2015JY0218,LY-96) 四川省教育厅创新团队项目(16TD0022)
【分类号】：R392
【正文快照】： 白细胞介素33(interleukin-33,IL-33)是一种前炎症细胞因子,是IL-1家族,也是可调控基因转录的核因子。它作为ST2受体的特异性配体,通过结合由ST2和IL-1受体辅助蛋白组成的二聚体,促进Th2型免疫应答的发生。IL-33除主要作用于Th2细胞以外,也可作用于树突状细胞、肥大细胞、巨噬

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本文编号：494002