恶性疟原虫PfRNase Ⅱ的克隆表达与降解特性的初步分析

发布时间：2017-07-16 17:21

  本文关键词：恶性疟原虫PfRNase Ⅱ的克隆表达与降解特性的初步分析

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【摘要】：目的利用原核表达系统诱导表达恶性疟原虫融合蛋白pGEX-PfRNaseⅡ,并分析其RNA降解特性。方法分析并选取恶性疟原虫3D7株PfRNaseⅡ的活性区,以cDNA为模板PCR扩增目的片段。将目的片段插入到pGEX-4T-1表达载体中,构建pGEX-4T-1-PfRNaseⅡ重组表达质粒,转化至大肠埃希菌BL21-CodonPlus(DE3),利用IPTG诱导表达目的蛋白pGEX-PfRNaseⅡ。应用Glutathione-SepharoseTM 4B树脂纯化目的蛋白。并用pGEX-PfRNaseⅡ体外分析PfRNaseⅡ的RNA降解特性。结果经PCR、双酶切、测序鉴定,pGEX-4T-1-PfRNaseⅡ重组表达质粒构建正确,转化DE3后在IPTG的作用下表达目的蛋白。纯化的目的蛋白pGEX-PfRNaseⅡ在体外可降解单链RNA,但不能降解双链RNA。pGEX-PfRNaseⅡ在低浓度的Mg2+条件下降解活性较强,高浓度Mg2+条件下活性受到抑制,在5mmol/L EDTA存在下活性降低。结论克隆表达的pGEX-PfRNaseⅡ重组蛋白能水解单链RNA,且该水解活性具有二价金属离子依赖性。
【作者单位】： 吉林大学人兽共患病研究所人兽共患病教育部重点实验室;
【关键词】： 疟原虫 恶性 PfRNaseⅡ 原核表达 RNA降解
【分类号】：R382
【正文快照】： *在真核生物中,DNA转录生成RNA,然而其中只有极少部分的RNA编码蛋白质,大部分基因组序列转录生成非编码RNA(ncRNA)[1-2]。ncRNA根据其功能的不同可分为持家ncRNA和调节ncRNA,其中调节ncRNA曾被认为是转录“噪音”。随着测序技术的发展,越来越多的研究表明ncRNA可在转录、转录，

本文编号：549786