gas6基因修饰小鼠骨髓间充质干细胞的构建及鉴定

发布时间：2017-07-30 05:24

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【摘要】：目的:制备携带生长停滞特异性基因6(gas6)的慢病毒,并构建和鉴定稳定表达生长停滞特异性蛋白6(GAS6)的小鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)。方法:采用全骨髓贴壁法分离培养MSCs,用流式细胞术检测MSCs标志分子;根据Gen Bank中小鼠gas6基因序列设计并合成上下游引物,以MSCs提取的m RNA制备的c DNA为模板扩增gas6基因片段,克隆入慢病毒表达载体,获得Lenti-gas6-GFP-zeocin质粒并测序鉴定;采用三质粒包装系统(穿梭质粒p Lenti-gas6-GZ、包装质粒p SPAX2和p MD2.G)包装慢病毒,并验证其表达目的基因情况;将浓缩的慢病毒离心感染第4代MSCs,用吉欧霉素(zeocin)筛选培养后获得稳定表达GAS6的MSCs,采用流式细胞术检测其阳性率以及表面标志分子表达情况。结果:构建了携带gas6基因的慢病毒,建立了gas6基因修饰的MSCs。结论:慢病毒载体可介导gas6基因在小鼠MSCs中过表达,且不会干扰MSCs的生物特性,为进一步研究gas6基因修饰的MSCs的治疗作用奠定了实验基础。
【作者单位】： 第四军医大学唐都医院传染科;第四军医大学基础部微生物学教研室;
【关键词】： 生长停滞特异性基因 慢病毒载体 骨髓间充质干细胞
【基金】：十二五国家科技重大专项(2013ZX10004609)
【分类号】：R329.2
【正文快照】： 生长停滞特异性蛋白(growth arrest-specificprotein 6,GAS6)是生长停滞特异性基因6(growtharrest-specific gene 6,gas6)编码的维生素K依赖的分泌型蛋白,由679个氨基酸残基组成,相对分子质量为75 000。gas6是在细胞生长停滞期表达升高的一类基因,当细胞增殖周期进入G0期时,其

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