下丘脑LHA-ARC Orexin-A通路对胃牵张敏感神经元放电活动和胃运动调控研究

发布时间：2017-08-10 09:06

  本文关键词：下丘脑LHA-ARC Orexin-A通路对胃牵张敏感神经元放电活动和胃运动调控研究

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【摘要】：目的:食欲素(orexin)是一种多功能神经肽,主要分布于下丘脑,其在能量稳态、奖励、成瘾和睡眠/觉醒等生理功能中发挥重要作用,也被视为调节摄食行为的一个重要的调质。本文拟通过逆行追踪结合荧光免疫组化方法,观察大鼠下丘脑外侧核(lateral hypothalamic area,LHA)-弓状核(Arcuate nucleus,ARC)orexin神经和功能通路构成,通过神经元细胞外放电记录和在体胃运动,探讨LHA-ARC orexin-A通路对胃传入信息以及胃运动的调控及机制。方法:本研究采用成年雄性Wistar大鼠,通过(1)采用荧光金(FG)逆行追踪结合荧光免疫组化方法,观察LHA-ARC orexin-A神经通路的构成。(2)采用细胞外放电记录方法,鉴定ARC orexin胃牵张敏感神经元(Gastric distention sensitive neurons,GD),并探讨ARC内orexin-A对GD神经元放电活动的影响及机制;采用电刺激LHA,观察ARC内orexin-A敏感的GD神经元放电活动改变,探讨orexin-A在LHA-ARC通路中调控作用。(3)ARC微量注射orexin-A和及其受体阻断剂SB334867,以及电刺激LHA,观察大鼠胃收缩幅度和频率的改变。结果:(1)荧光金(FG)逆行追踪结合荧光免疫组化实验结果显示,ARC微量注射FG后1周,大鼠经心灌注固定、脑冰冻切片,以及orexin-A免疫组化染色,在LHA可见FG/orexin双重标记的神经元,提示,LHA中orexin-A神经元可发出纤维投射至ARC。(2)大鼠ARC共记录到149个GD神经元,其中GD-E神经元91个,GD-I神经元58个。ARC微量注射orexin-A,62个(62/91,68.1%)GD-E神经元兴奋性显著增加,其放电频率由4.27±0.58 Hz增加到8.46±0.95 Hz(P0.01);39个(39/58,67.2%)GD-I神经元兴奋性也显著增强,其放电频率由4.02±0.53 Hz增加到5.43±0.57 Hz(P0.05)。然而,ARC给予大鼠orexin-A受体拮抗剂SB334867,再给予orexin-A,orexin-A兴奋效应完全被阻断(P0.05)。(3)电刺激LHA,在ARC检测到的62个orexin-A敏感GD-E神经元中,有43个(43/62,69.4%)放电频率由4.08±0.55 Hz升高至9.04±1.03 Hz,兴奋显著增强(P0.01);有11个(11/62,17.7%)放电活动被抑制(2.01±0.43 Hz,P0.05),剩余8个(8/62,12.9%)神经元放电活动则无明显变化(3.97±0.58 Hz,P0.05)。在记录到的39个orexin-A敏感GD-I神经元中,26个(26/39,66.7%)也出现兴奋反应,放电频率从3.87±0.51 Hz升高8.13±0.94 Hz(P0.05),有8个(8/39,20.5%)神经元被抑制(1.95±0.37 Hz,P0.05),5个(5/39,12.8%)神经元没有变化(4.01±0.49Hz,P0.05)。然而ARC预先注射orexin-A受体拮抗剂SB334867,可减弱LHA电刺激对ARC orexin-A敏感的GD神经元的兴奋效应(4.23±0.53 Hz,P0.05)。(4)胃运动实验结果显示:在ARC注射不同浓度orexin-A,大约5 min后,大鼠胃收缩幅度和频率呈剂量依赖性增加(P0.05~0.01)。ARC注射SB334867,可完全消除orexin-A对大鼠胃运动的兴奋效应(P0.05)。(5)电刺激LHA约3 min后,大鼠胃运动频率和幅度开始增加,该兴奋效应大约维持15 min;ARC微量注射SB334867,可部分减弱电刺激LHA诱导的胃运动兴奋效应(P0.05)。结论:ARC orexin-A对大鼠GD神经元和胃运动有调控作用,该作用可能通过调控Orexin A受体活动实现的;LHA可能参与ARC Orexin-A对GD敏感神经元和胃运动的调控过程。
【关键词】：下丘脑外侧核 弓状核 神经通路 胃牵张敏感神经元 胃运动
【学位授予单位】：青岛大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R338
【目录】：

• 摘要2-4
• Abstract4-7
• 引言7-9
• 第1章 材料与方法9-17
• 1.1 实验材料9-11
• 1.1.1 实验动物9
• 1.1.2 主要实验仪器9
• 1.1.3 主要实验试剂9-10
• 1.1.4 试剂配制10-11
• 1.2 实验方法11-16
• 1.2.1 荧光金逆行追踪实验11-12
• 1.2.2 电生理实验12-14
• 1.2.3 胃运动实验14-16
• 1.3 统计学分析16-17
• 第2章 实验结果17-26
• 2.1 大鼠LHA-ARC Orexin-A神经元投射17
• 2.2 电生理实验结果17-21
• 2.3 胃运动实验结果21-26
• 第3章 讨论26-28
• 第4章 结论28-29
• 参考文献29-32
• 综述32-54
• 综述参考文献43-54
• 攻读学位期间研究成果54-55
• 致谢55-56

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