多房棘球绦虫apomucin基因qPCR引物的筛选及潜在应用

发布时间：2017-08-12 01:39

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【摘要】：目的筛选多房棘球绦虫(Echinococcus multilocularis)apomucin基因(Em-apo)的qPCR最佳引物,探索该基因的表达水平。方法根据Gene DB中4种Em-apo序列,设计引物并通过荧光定量PCR(q PCR)对引物进行分析,确定每对引物的特异性、PCR扩增效率。利用筛选得到的最佳引物,分别检测经阿苯达唑(5μg/ml)和胰岛素(100 ng/ml)培养处理的多房棘球绦虫原头节(1 000个)Em-apo表达水平的变化,用稀释阿苯达唑的DMSO和胰岛素的PBS作为各自的对照。结果筛选分别得到了Em-apo-1、Em-apo-2/3、Em-apo-4和内参基因actin的特异引物各1对,qPCR熔解曲线分析结果显示,每对引物的扩增产物只出现单峰,且扩增效率均为95%~101%。qPCR分析结果显示,与DMSO对照组(1.00)相比,多房棘球绦虫原头节经阿苯达唑处理后,Emapo-1、Em-apo-2/3和Em-apo-4的表达水平均有所上升,分别为1.51±0.27、1.39±0.30和1.14±0.18,三者差异无统计学意义(P0.05);与PBS对照组(1.00)相比,原头节经胰岛素处理后,Em-apo表达水平的变化不一,其中Em-apo-1的表达水平基本不变,Em-apo-4的表达水平有所下降,而Em-apo-2/3明显下调(0.73±0.09),但三者差异无统计学意义(P0.05)。结论本实验筛选确定的Em-apo基因的qPCR引物特异,可用于Em-apo基因表达水平的检测。多房棘球绦虫原头节经阿苯达唑和胰岛素处理后,对Em-apo-1、Em-apo-2/3和Em-apo-4的表达水平有一定的影响。
【作者单位】： 甘肃农业大学动物医学院;中国农业科学院兰州兽医研究所 家畜疫病病原生物学国家重点实验室 甘肃动物寄生虫病重点实验室;新疆大学生命科学与技术学院;江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心;
【关键词】： 多房棘球绦虫 apomucin基因 qPCR 阿苯达唑 胰岛素
【基金】：国家自然科学基金(No.31460659)~~
【分类号】：R383.33
【正文快照】： (1 College of Veterinary Medicine,Gansu Agricultural University,Lanzhou 730070,China;2 State KeyLaboratory of Veterinary Etiological Biology,Lanzhou Veterinary Research Institute,Chinese Academy ofAgricultural Science,Lanzhou 730046,China;3 College of Li

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本文编号：659201