全人源抗IL-33scFv-IgG1Fc融合蛋白在CHO k1细胞中稳定高表达

发布时间：2017-08-15 21:59

  本文关键词：全人源抗IL-33scFv-IgG1Fc融合蛋白在CHO k1细胞中稳定高表达

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【摘要】：目的利用两种不同真核表达载体构建全人源抗白细胞介素33单链抗体c片段(IL-33 sc Fv-Fc)重组载体,转染中国仓鼠卵巢(CHO)k1细胞,筛选稳定高表达单细胞株以提高融合蛋白产量。方法双酶切前期构建的重组质粒pc DNA3.1/SPsc Fv-Fc,回收SP-sc Fv-Fc片段,插入载体PMH3EN中,构建PMH3EN/SP-sc Fv-Fc重组载体并与重组质粒pc DNA3.1/SP-sc Fv-Fc分别转染CHO k1细胞;反转录PCR、Western blot法检测目的基因sc Fv-Fc的转录及表达;Dot blot法筛选稳定高表达细胞株;ELISA检测sc Fv-Fc的水平及生物学活性。结果重组质粒测序结果表明成功构建了真核表达载体PMH3EN/SP-sc Fv-Fc,插入目的基因SP-sc Fv-Fc大小为1560 bp左右。反转录PCR检测重组质粒表达情况显示两组重组质粒的目的基因在CHO k1细胞中均成功转录。sc Fv-Fc不仅可分泌到细胞培养基中,还可与人IL-33以及抗人Ig G1 Fc特异性结合。重组载体PMH3EN/SP-sc Fv-Fc组融合蛋白表达水平相对较高。经过4轮筛选,选出了稳定高表达细胞株,初步测其sc Fv-Fc表达产量为10 mg/L;竞争ELISA检测结果显示sc Fv-Fc可显著抑制IL-33与其受体ST2的结合。结论在CHO k1细胞成功高表达IL-33 sc Fv-Fc。
【作者单位】： 四川医科大学基础医学院;
【关键词】： 白细胞介素 单链抗体c片段(sc Fv-Fc) CHO k细胞 表达载体
【基金】：四川省科技厅项目(2015JY0218,LY96) 四川省教育厅项目(14ZB0158)
【分类号】：R329.2
【正文快照】： 白细胞介素33(interleukin 33,IL-33)是IL-1家族成员,广泛表达于多种组织与细胞[1],主要参与调节Th2细胞型免疫反应,与过敏性疾病、自身免疫性疾病有明显的相关性。用IL-33抗体抑制IL-33/ST2通路,可以减轻小鼠过敏性哮喘、过敏性鼻炎以及类风湿性关节炎症状,抑制病情发展[2-4]，

本文编号：680049