中试规模纯化重组鼠疫rF1-V融合蛋白及其免疫原性分析

发布时间：2017-08-16 21:41

  本文关键词：中试规模纯化重组鼠疫rF1-V融合蛋白及其免疫原性分析

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【摘要】：重组F1-V融合蛋白(rF1-V)是目前在进行临床研究的鼠疫亚单位疫苗的主要成分。本研究摸索了rF1-V的可溶表达条件,并对条件进行了优化和放大,确定的中试发酵工艺为:在重组菌对数生长期中期加入50μmol/LIPTG,25℃诱导表达5h。通过硫酸铵分级沉淀、离子交换、疏水相互作用层析和凝胶过滤四步纯化,最终得到纯度为99%、回收率大于20%且各项检测指标合格的蛋白。在此基础上,将蛋白使用氢氧化铝佐剂进行吸附,在小鼠体内进行了免疫原性研究。ELISA测定两次皮下免疫后血清的抗体滴度。比较融合蛋白免疫组(rF1-V)与单一抗原免疫组(rF1、rV)以及联合抗原免疫组(rF1+rV)之间体液免疫反应的差异。结果显示:20μgrF1-V免疫剂量组诱导的抗F1抗体滴度明显高于其他组,抗V抗体滴度与其他组相比没有显著差异。表明本工艺制备的rF1-V抗原有望作为鼠疫亚单位疫苗的主要组分。
【作者单位】： 军事医学科学院生物工程研究所;
【关键词】： 鼠疫耶尔森菌 重组F-V融合蛋白 发酵 分离纯化 免疫原性 亚单位疫苗
【基金】：国家传染病重大专项(No.2013ZX10004001)资助~~
【分类号】：R392
【正文快照】： 鼠疫是由鼠疫耶尔森菌(Yersinia pestis,以下简称鼠疫菌)引起的自然疫源性烈性传染病。据记载,在人类历史上,世界范围内曾暴发过3次鼠疫大流行,并致使至少1.6亿人死亡[1]。人间鼠疫包括腺鼠疫、肺鼠疫、败血型鼠疫等类型,其中肺鼠疫通过气溶胶在人与人之间传播,在不能及时治疗

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