胚胎胎SD大鼠神经干细胞原代培养及分化鉴定的实验研究

发布时间：2017-08-17 20:26

  本文关键词：胚胎胎SD大鼠神经干细胞原代培养及分化鉴定的实验研究

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【摘要】：【目的】建立胚胎SD大鼠神经干细胞(neural stem cells,NSCs)原代培养的方法,免疫荧光鉴定其纯度和分化潜能。【方法】取孕14 d的SD大鼠,麻醉消毒后分离胎鼠大脑海马组织,研磨并胰酶消化后离心,计数后分瓶培养,倒置显微镜下观察神经干细胞生长情况。当神经球直径100~150μm时,胰酶消化后计数传代培养。取第3代神经干细胞行巢蛋白免疫荧光染色鉴定其纯度。将第3代神经干细胞消化计数后种植于预铺多聚赖氨酸的培养板中,7 d后行微管相关蛋白2(microtubulinassociated protein 2,MAP2)、胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)和髓鞘碱性蛋白(myelin basic protein,MBP)免疫荧光染色鉴定其分化潜能。【结果】显微镜下可见神经干细胞生长良好,增殖迅速,7 d左右可形成直径大小为150μm的神经球,细胞透光度好。第3代神经干细胞经免疫荧光染色证实纯度95%以上。分化鉴定实验可见MAP2、GFAP和MBP阳性细胞。【结论】成功建立胚胎SD大鼠神经干细胞原代培养方法,细胞状态好、纯度高。神经干细胞有多样分化潜能,可分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞,为神经系统损伤修复和退变性疾病的细胞替代治疗提供了实验基础。
【作者单位】： 武警后勤学院附属医院脑科医院 天津市神经创伤修复重点实验室;
【关键词】： 神经干细胞 原代培养 免疫荧光 分化
【基金】：国家自然科学基金项目(81301050,81271392,81471275,81401067) 天津市应用基础与前沿技术研究计划项目(14JCQNJC10200) 中国博士后基金项目(2013M542583)
【分类号】：R338
【正文快照】： 1992年,Reynolds和Weiss[1]首次成功从成年小鼠纹状体和海马分离培养出既能不断分裂增殖、又有多种分化潜能的细胞,即神经干细胞(neural stemcells,NSCs),打破了神经细胞不能再生的观念,“神经干细胞”这一概念被正式引入神经科学领域并引发研究热潮。NSCs是一群能自我更新并

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2 朱晓峰;神经干细胞研究的几个问题[J];黑龙江医药科学;2002年05期

3 张敬军,夏作理,刘焯霖;神经干细胞的研究[J];泰山医学院学报;2002年02期

4 季庆;神经干细胞的研究近况[J];医学综述;2002年05期

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7 张国福,林建华;神经干细胞的研究进展[J];福建中医药;2003年03期

8 刘岳文,杜永红,王可,徐正顺;神经干细胞的研究进展[J];河南科技大学学报(医学版);2003年02期

9 王任直;张波;窦万臣;郑彤;;神经干细胞应用的理论基础和策略[J];医学研究通讯;2003年09期

10 刘佳梅,陈东,孟晓婷;一种获得神经干细胞单细胞的新方法[J];中国康复理论与实践;2004年01期

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1 王华;王文辉;林蕾;;神经干细胞的研究进展及前景展望[A];第六届西部介入放射学术会议宁夏医学会放射学分会第四届年会介入放射学新技术继续教育学习班论文汇编[C];2009年

2 戴毅;韩忠朝;;神经干细胞研究进展及临床前景展望[A];中国解剖学会第八届组织学与胚胎学专业青年研讨会论文集[C];2004年

3 孙一睿;胡锦;王尔松;奚才华;姚海军;;单层黏附培养技术在哺乳动物神经干细胞体外稳定增殖和多向分化中的应用[A];中国医师协会神经外科医师分会第四届全国代表大会论文汇编[C];2009年

4 刘佳梅;;脑内皮细胞与神经干细胞共培养促进神经干细胞的迁移[A];中国解剖学会第十一届全国组织学与胚胎学青年学术研讨会论文汇编[C];2009年

5 魏勇;应大君;张伟;董世武;;幼龄家猪脑SVZ神经干细胞的分离与鉴定[A];解剖学杂志——中国解剖学会2002年年会文摘汇编[C];2002年

6 司银楚;朱培纯;程龙;吴海霞;许红;;去皮层血管对成年大鼠脑内神经干细胞的影响[A];解剖学杂志——中国解剖学会2002年年会文摘汇编[C];2002年

7 李学坤;郭安臣;左萍萍;;胎鼠海马神经干细胞的培养、鉴定及亚克隆[A];中国药理学会第十届全国神经学术会议暨浙江省药理学会2002年年会论文摘要集[C];2002年

8 李力;万琪;;小鼠神经干细胞培养及缺血神经元对其增殖、分化的影响[A];中华医学会第七次全国神经病学学术会议论文汇编[C];2004年

9 李力;万琪;刘永红;张巍;;小鼠神经干细胞培养及缺血神经元对其增殖、分化的影响[A];科技、工程与经济社会协调发展——中国科协第五届青年学术年会论文集[C];2004年

10 徐群渊;;神经干细胞的分离、纯化和永生化[A];中国组织工程、干细胞与神经再生学术会议论文集[C];2004年

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3 ;我国科学家成功地在体外培养出神经干细胞[N];中国高新技术产业导报;2001年

4 时仲省 高思敏 刘春阳;河南医大成功培养人胚神经干细胞[N];中国医药报;2001年

5 北京市神经外科研究所 北京天坛医院 王忠诚邋院士;神经修复的生力军——神经干细胞[N];健康报;2008年

6 孙国根;神经干细胞并非“全能制造者”[N];中国医药报;2009年

7 特约记者 风云;我国科学家成功培养出体外神经干细胞[N];北京科技报;2001年

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10 王艳红;意科学家研究用神经干细胞治疗脑癌[N];中国中医药报;2000年

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8 王培福;大鼠神经干细胞的培养和鉴定[D];中国人民解放军军医进修学院;2002年

9 王岩;神经干细胞在大鼠脊髓内存活及迁移的实验研究[D];吉林大学;2007年

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