棉鼠SP-D基因的克隆及其在LPS诱导肺损伤模型中的表达分析

发布时间：2017-08-19 15:33

  本文关键词：棉鼠SP-D基因的克隆及其在LPS诱导肺损伤模型中的表达分析

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【摘要】：目的:初步探讨棉鼠肺表面活性蛋白D(surfactant-associated protein D,SP-D)核苷酸和氨基酸序列与其他物种间的同源性和交叉反应性,观察SP-D m RNA水平和SP-D蛋白在棉鼠肺损伤模型中的表达规律,为探究呼吸道疾病发病机制提供科学的实验依据。方法:SPF级棉鼠32只随机分为生理盐水对照组和脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)实验组(实验组再按给药后24、48和96 h分为3个亚组,每组8只)。实验组采用腹腔注射给予2 mg/kg的脂多糖,对照组给予相当剂量的生理盐水。提取棉鼠肺总RNA,经RT-PCR扩增SP-D基因并克隆测序,采用生物信息学软件对测序结果进行同源性和系统进化分析;HE染色观察各组棉鼠肺组织病理学变化;real-time PCR检测SP-D m RNA水平;Western blot检测SP-D蛋白表达。结果:棉鼠SP-D基因开放阅读框含1 113 bp,编码370个氨基酸,与部分已知其他物种SP-D核苷酸和氨基酸序列同源性分别在75.64%~90.01%和72.68%~88.56%之间;在SP-D基因构建的系统进化树上,棉鼠与其他啮齿类动物形成一个独特的分支;与对照组相比,实验组肺组织病理特征性变化随LPS刺激时间延长而加剧;SP-D m RNA水平和SP-D蛋白表达水平随LPS处理时间的延长而逐渐增加,在LPS处理24 h后,SP-D m RNA水平和SP-D蛋白表达开始明显增加并出现统计学差异(P0.05),48 h时后SP-D m RNA水平和SP-D蛋白表达水平均增加到峰值,96 h后两者仍保持较高水平,与对照组相比有统计学差异(P0.01)。结论:棉鼠SP-D核苷酸和氨基酸序列与其他物种间具有较高同源性,且棉鼠和其他物种SP-D蛋白间存在交叉反应性;棉鼠SP-D m RNA水平和SP-D蛋白表达水平在肺损伤模型中均存在时间依赖性,可作为判断肺损伤疾病不同发展阶段的生物标记。
【作者单位】： 重庆医科大学附属儿童医院儿科研究所儿童发育疾病研究教育部重点实验室儿科学重庆市重点实验室重庆市儿童发育重大疾病诊治与预防国际科技合作基地;
【关键词】： 棉鼠 肺表面活性蛋白D 克隆 表达 脂多糖
【分类号】：R-332;R56
【正文快照】： 肺表面活性蛋白D(surfactant-associated proteinD,SP-D)是由肺泡Ⅱ型上皮细胞和细支气管上Clara细胞分泌的一种水溶性肺泡表面活性物质。它对维持肺泡正常张力和促进气体交换起着重要作用[1-2]。它在发挥初始免疫应答,介导先天性免疫防御以及清除凋亡细胞等方面的作用均已得

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1 席裕瑞;;在丝虫病治疗中棉鼠和沙鼠的单核吞噬细胞系活力的比较[J];国外医学(寄生虫病分册);1984年05期

2 ;感染棉鼠丝虫的大白鼠的病理变化[J];国外医学参考资料(寄生虫病分册);1974年05期

3 ;[J];;年期

，

本文编号：701523