小鼠胸腺与异种抗原细胞的相互作用及其相关机制的研究

发布时间：2017-08-21 05:21

  本文关键词：小鼠胸腺与异种抗原细胞的相互作用及其相关机制的研究

  更多相关文章： 胸腺内注射 人肺腺癌细胞 胸腺微环境 中枢免疫耐受

【摘要】：胸腺作为中枢免疫器官,是T淋巴细胞发育成熟的主要场所,在控制自身免疫耐受中具有极为重要的作用。经典的胸腺免疫耐受理论认为,T细胞在发育过程中,如果遇到自身或外源性抗原,将形成对该抗原的中枢免疫耐受。这是因为,如果异种抗原进入胸腺一般会被抗原提呈细胞吞噬并加工提呈,在其细胞表面生成抗原肽-MHCⅡ类分子复合体,供发育分化过程中的T细胞识别并发生凋亡。曾有文献报道：人为将同种异体的胰岛细胞或肝细胞注入到受体胸腺中一段时间后,仍可以在受体胸腺中找到注射用胰岛细胞或肝细胞,甚至在胸腺中发现有肝小叶结构的生成。但在1997年时有人发现,胸腺内注射的同种异体抗原在受体胸腺内的存活时间有限,而当受体注射免疫抑制剂ALS或CsA时,才会延长供体抗原在受体胸腺内的存活时间,证明胸腺内有可能发生了一定的免疫应答反应。针对上述问题所做出的不同结果,在本实验中我们初步探讨了将异种抗原细胞A549(人肺腺癌细胞)移植于昆明鼠胸腺内所发生的反应,及其在此过程中与胸腺组织微环境相互作用的相关机制。本实验中我们首先采用DiI染料标记的人肺腺癌细胞A549在小鼠胸腺内进行微创注射,然后选择不同的时间检点对小鼠胸腺组织进行组织病理学观察,初步研究了异种肿瘤细胞A549在小鼠胸腺内的命运及其对胸腺微环境造成的影响；进而采用流式细胞检测技术,分析了小鼠胸腺内注射异种抗原细胞A549后T淋巴细胞亚群的细胞数目及比例的变化与小鼠胸腺内的免疫状态及免疫水平。同时选用在同等条件下小鼠脾脏内注射等量人肺腺癌细胞的方法作为对照,对比分析了异种抗原细胞A549在小鼠胸腺与脾脏内的不同命运及可能发生的免疫机制。通过以上研究,我们初步得到以下结果：1.异种抗原细胞不能在胸腺中长期存在,会被胸腺中的免疫细胞杀伤并清除,但其清除肿瘤细胞的时间远远长于脾脏。2.胸腺内注射异种抗原细胞后,CD4+T细胞与CD8+T细胞的比例上升,CD4+/CD8+T细胞的比值下降；而脾脏内注射异种抗原细胞后,CD4+T细胞的比例上升,CD8+T细胞比例无显著性变化,CD4+/CD8+T细胞的比值增大。3.小鼠胸腺内异种抗原细胞的注射,会使胸腺微环境遭到破坏,包括注射时造成的机械损伤,同时肿瘤细胞的存在导致小鼠胸腺皮质区面积减小,髓质区面积增大,纤维化上皮细胞增生及细胞外基质增多等,但随着肿瘤细胞的凋亡及清除,胸腺微环境逐渐修复并回归常态。4.异种抗原细胞A549的小鼠胸腺内注射使得胸腺中T淋巴细胞各亚群的比例发生变化,其中双阳性T淋巴细胞大量凋亡,而双阴性及单阳性细胞的比例相对升高。通过以上结果,我们得出的结论是：1.在此实验条件下,小鼠胸腺内与异种抗原细胞的相互作用,会使胸腺微环境受到伤害,并对胸腺细胞的发育分化产生一定的影响。2.相同的异种抗原细胞,在分别移植于胸腺或脾脏均会诱导产生由淋巴细胞介导的排斥反应；但发生在胸腺的免疫效应,明显地迟于脾脏。3.研究表明：在胸腺内成熟的淋巴细胞对异种抗原具有识别和应答能力。本论文关于胸腺与异种抗原诱导的相互作用及其相关机制的研究,对全面认识胸腺具有重要的意义,研究结果将为自身免疫耐受及器官移植或肿瘤免疫提供相应的实验依据。
【关键词】：胸腺内注射 人肺腺癌细胞 胸腺微环境 中枢免疫耐受
【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R392
【目录】：

• 中文摘要8-10
• ABSTRACT10-12
• 符号说明12-13
• 1 前言(包括文献综述)13-25
• 1.1 胸腺微环境及其功能13-15
• 1.2 T淋巴细胞的发育分化及中枢免疫耐受的形成15-20
• 1.3 胸腺内免疫耐受现象的研究进展20-21
• 1.4 脾脏的结构及功能21-23
• 1.5 异种抗原与A549细胞系23
• 1.6 本课题的研究思路及意义23-25
• 2 实验材料与方法25-34
• 2.1 实验材料与仪器设备25-28
• 2.1.1 实验材料25
• 2.1.2 主要实验试剂25-27
• 2.1.3 主要实验仪器27-28
• 2.2 实验方法28-34
• 2.2.1 人肺腺癌细胞A549的培养与Dil染色标记28-29
• 2.2.2 小鼠胸腺及脾脏内异种抗原细胞的移植29-30
• 2.2.3 小鼠脾脏及胸腺的组织病理学观察30-32
• 2.2.4 流式细胞术检测胸腺内CD4CD8T淋巴细胞亚群比例变化32
• 2.2.5 流式细胞术检测脾脏内CD4CD8T淋巴细胞亚群比例变化32-33
• 2.2.6 数据分析33-34
• 3 实验结果34-48
• 3.1 A549细胞Dil染色效果观察34
• 3.2 小鼠胸腺内注射人肺腺癌细胞A549后的解剖学观察34-35
• 3.3 小鼠胸腺HE染色的组织病理学观察35-39
• 3.4 小鼠脾脏HE染色的组织病理学观察39-42
• 3.5 小鼠胸腺内CD4+/CD8+T淋巴细胞亚群比例的变化情况42-43
• 3.6 小鼠脾脏内CD4+/CD8+T淋巴细胞亚群比例的变化情况43-44
• 3.7 人肺腺癌细胞对小鼠胸腺微环境的影响44-48
• 3.7.1 小鼠胸腺微环境的组织病理学分析44-46
• 3.7.2 小鼠胸腺中T淋巴细胞亚群的变化情况46-48
• 4 讨论48-52
• 4.1 人肺腺癌细胞A549在小鼠胸腺及脾脏内的不同命运48-50
• 4.2 异种抗原细胞A549对小鼠胸腺微环境的影响50-52
• 5 论文总结与展望52-54
• 参考文献54-61
• 致谢61-62
• 学位论文评阅及答辩情况表62

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本文编号：711060