肺炎链球菌肽链内切酶O（PepO）在宿主固有免疫激活中的作用及机制
本文关键词：肺炎链球菌肽链内切酶O（PepO）在宿主固有免疫激活中的作用及机制
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【摘要】：背景:肺炎链球菌肽链内切酶O(PepO)是一种新近发现的且保守表达的肺炎链球菌毒力蛋白,可帮助细菌黏附侵袭入宿主细胞。有研究显示一些毒力因子可与宿主固有免疫受体相互作用,激活特异的信号通路,从而诱导宿主的免疫防御反应。那么PepO作为一种毒力因子是否参与了宿主固有免疫反应的激活?其作用机制又是怎样的呢?探索毒力因子与宿主的相互作用机制可能推动抗菌药物以及蛋白疫苗的研发,因此本研究旨在探索PepO在宿主固有免疫激活中的作用及机制。方法:利用原核表达重组蛋白技术制备重组PepO(rPepO)蛋白溶液。构建气管内滴注rPepO的小鼠模型,在体内评价rPepO的固有免疫激活效应。采用小鼠腹腔分离的巨噬细胞(PEMs)、小鼠肺上皮细胞株(MLE-12)、人支气管上皮细胞株(Beas-2B)在体外明确rPepO发挥免疫激活作用的效应细胞并进一步研究相关的信号通路。利用定量PCR(Q-PCR)、酶联免疫吸附试验(ELISA)分析rPep O诱导的细胞因子表达。通过组织切片及苏木精-伊红(HE)染色分析肺组织内的炎性改变。利用流式细胞术及瑞士-吉姆萨染色分析支气管肺泡灌洗液(BALF)中有核细胞的种类。利用小分子抑制剂、蛋白印迹、免疫荧光试验分析rPepO激活的相关信号通路。结果:本研究中我们证实了PepO在体内外均能诱导小鼠较强的固有免疫反应。气管内滴注rPepO后,小鼠肺组织内细胞因子、趋化因子分泌显著增加且肺内出现广泛的中性粒细胞浸润。与野生小鼠相比,Toll样受体2(TLR2)、Toll样受体4(TLR4)缺陷小鼠分泌的细胞因子、趋化因子显著减少(p㩳0.001),中性粒细胞浸润也显著减少,但组织损伤更为严重。在体外实验中,rPepO可刺激PEMs分泌白介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、CXCL1和CXCL10,该效应依赖于TLR2、TLR4以及p38、Akt和p65的激活。而rPepO通过MAPKs-NF-κB-PI3K/Akt信号通路促进MLE-12细胞分泌IL-6和CXCL1,通过PI3K/Akt-MAPKs信号通路促进Beas-2B细胞分泌IL-8和CXCL-10。结论:Pep O具有极强的宿主固有免疫激活效应,且这种效应部分依赖于宿主TLR2、TLR4受体。
【关键词】：肺炎链球菌肽链内切酶O(Pep O) 固有免疫 TLR2 TLR4
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R378.1
【目录】：
- 符号说明4-5
- 中文摘要5-7
- 英文摘要7-9
- 前言9-10
- 1 材料方法10-14
- 2 实验结果14-34
- 3 讨论34-38
- 参考文献38-44
- 全文总结44-45
- 文献综述45-57
- 参考文献51-57
- 致谢57-58
- 攻读学位期间发表的学术论文58
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，本文编号：718915
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