包涵体蛋白3种纯化方法的比较

发布时间：2017-08-23 04:35

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【摘要】：目的比较3种纯化方法对表达的肠道病毒71型(EV71)VP1区包涵体蛋白的纯化效果。方法分别用差速离心法、固定化金属离子亲和层析(IMAC)及不同浓度饱和硫酸氨沉淀法3种包涵体蛋白纯化法对原核表达EV71 VP1包涵体蛋白进行纯化,蛋白垂直(SDS-PAGE)电泳检测蛋白纯化效果。结果差速离心法可以进行大批量表达蛋白纯化,纯化效果较好,但存在蛋白损失较多,且纯化蛋白不能反复冻融的问题。IMAC柱纯化获得的蛋白纯度较高,且蛋白性状稳定,但仍存在纯化蛋白量较少的问题。饱和硫酸氨沉淀纯化法无法获得纯度较高的包涵体蛋白。结论差速离心法可用于大批量蛋白纯化,纯化蛋白应避免反复冻融,可小量分装冻存后备用。IMAC柱纯化可获得纯度较高且性状相对稳定的纯化蛋白,其在相应抗体检测方法学的建立及疫苗制备方面均有广泛用途。饱和硫酸氨法只适用于表达蛋白的初步浓缩纯化。
【作者单位】： 解放军第三0二医院临床研究管理中心;
【关键词】： 包涵体蛋白 蛋白纯化 蛋白垂直电泳
【基金】：国家自然科学基金资助项目(81271846)
【分类号】：R392
【正文快照】： 包涵体是外源基因在细胞中表达量过高形成的一种膜包裹的高密度、不溶性蛋白颗粒。该蛋白不具有生物学活性,其分子的空间结构表现为非折叠态的聚集体,复性后可恢复其生物学活性[1]。研究发现外源基因低表达时很少形成包涵体,蛋白表达合成速度越快、量越高越容易形成包涵体[2-4

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本文编号：723008