Wnt1通过上调SRA和NF-κB参与LPS诱导的炎症反应

发布时间：2017-08-26 08:07

  本文关键词：Wnt1通过上调SRA和NF-κB参与LPS诱导的炎症反应

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【摘要】：研究背景： 机体受到细菌感染时,细菌释放的LPS(脂多糖)成分可以激发机体的免疫炎症反应。由LPS激发的炎症反应涉及了多种炎症信号通路(包括MAPK,NF-KB等)的激活。在这其中LPS通过结合于细胞膜表面的toll样受体(主要是TLR4)和清道夫受体A类(SRA)激活下游信号分子myd88进而使p65(NF-KB通路主要转录因子)入核增多,p65入核后增强了TNF-α,IL-6,iNOS的转录,使炎症信号进一步扩大。 Wnt通路分为1.经典wnt通路2.非经典wnt通路3.钙离子依赖型通路,属于一类生物体内较为保守的信号通路,主要参与了胚胎发育,细胞增殖,癌症发生等。Wnt1分子属于wnt经典通路的一员。Wnt1由细胞合成并分泌到胞外后,通过结合于细胞膜表面的FZD1,LRP5,LRP6所形成的复合物受体激活了细胞质内β-catenin分子,使β-catenin分子入核后促进TCF1/TCF4黑心录因子激活,增强对相关基因的转录。 以往研究发现,在PC12细胞(大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞)内wnt1通过促进NF-KB激活抑制了细胞凋亡。但是,wnt通路是否也参与了LPS引起的炎症反应还不甚明了。 目的： 关于LPS如何通过调节SRA以及wnt1激活下游NF-kB的机制还不甚明了。本研究旨在探究wnt1在LPS诱导的炎症反应中的作用,并分析wnt1、SRA和NF-kB三者之间的关系。 方法： 1)对于THP1细胞给予PMA激活使其分化为巨噬细胞后作为所有后续实验用的细胞。用LPS处理后,Western blot检测细胞中Wnt1蛋白含量的变化。 2)对THP1细胞转染Wnt1siRNA,或Wntl过表达质粒后,用Western blot检测细胞中NF-KB蛋白表达量的变化,用ELISA和WB检测细胞中炎症因子IL-6, TNF-α, iNOS的分泌量。 3)将THP1细胞分别转染WntlsiRNA或Wnt1过表达质粒,检测处理后的细胞中SRA受体和TLR4受体的表达情况。对于Wntl过表达的THP1细胞而言,给予SRAsiRNA转染后,检测细胞中细胞中的NF-KB蛋白表达量。 4)经过LPS处理的THP1细胞转染FZD1siRNA或加入VAX939(p-catenin抑制剂)后,检测SRA受体蛋白表达量。 结果： 1)对于THP1细胞给予PMA和LPS处理后,细胞中Wnt1蛋白表达上升。 2)对THP1细胞转染Wntl siRNA,引起NF-kB表达下降和炎症因子IL-6,TNF-α, iNOS的分泌减少；转染Wntl过表达质粒后,THP1细胞中的NF-kB表达量和炎症因子IL-6,TNF-α,iNOS的分泌量均上升。 3)对THP1细胞转染Wntl siRNA,引起细胞中SRA受体表达下降；给予Wntl过表质粒转染后,SRA表达上升。 4)在LPS处理之前的THP1细胞先转染FZD1siRNA或加入VAX939(β-catenin抑制剂), SRA受体蛋白表达量较单独LPS处理下降。 结论： 1. wnnt1蛋白参与了LPS引起的NF-KB激活,炎症因子的分泌。 2. wnt1可以调节SRA受体(介导了LPS引起的NF-KB激活)的表达。 3. wnt1与SRA在细胞膜上存在着共定位,wnt1也可以通过SRA受体激活NF-KB激活。
【关键词】：脂多糖(LPS) Wnt通路 清道夫受体A(SRA) NF-KB
【学位授予单位】：浙江大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R363
【目录】：

• 致谢4-5
• 中文摘要5-8
• Abstract8-11
• 缩略语11-12
• 目录12-13
• 1 前言13-14
• 2 材料和方法14-22
• 2.1 实验材料14-17
• 2.2 实验方法17-22
• 3 结果22-28
• 3.1 LPS处理和PMA处理可以促进THP-1细胞wnt1的表达22-23
• 3.2 Wnt1激活NF-KB和炎症因子23-24
• 3.3 Wnt1通过诱导SRA表达参与LPS介导的NF-KB活化24-26
• 3.4 Wnt1通过其经典通路诱导SRA表达26-28
• 4 讨论28-30
• 参考文献30-32
• 综述32-40
• 参考文献37-40
• 作者简介及科研成果40

【共引文献】

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1 余梦辰;李斌;周红;;内毒素识别、内化及清除相关受体的研究进展[J];重庆医学;2013年29期

2 唐芳;马武开;姚血明;;Wnt/β-catenin信号通路与骨关节炎[J];风湿病与关节炎;2014年02期

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本文编号：740569