SCAP重组腺病毒对ATDC5细胞增殖和凋亡的影响

发布时间：2017-08-27 05:03

  本文关键词：SCAP重组腺病毒对ATDC5细胞增殖和凋亡的影响

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【摘要】：目的构建固醇调节元件结合蛋白裂解激活蛋白(SRREBP cleavage activating protein,SCAP)基因干扰(small interfering RNA,siRNA)和过表达重组腺病毒,观察其对ATDC5软骨干细胞增殖及凋亡的影响。方法应用pAd EasyTM腺病毒载体系统构建重组腺病毒质粒p Ad-SCAPsiRNA和p AdSCAP,在HEK293细胞中分别包装和扩增。RT-PCR和Western blot检测ATDC5细胞中SCAP的表达,流式细胞仪检测SCAP腺病毒对ATDC5细胞周期和凋亡的影响,Western blot检测凋亡相关蛋白Cleaved Caspase-3、p-JNK的表达。结果成功获腺病毒si SCAP(滴度为2.5×10~(10)PFU/m L)和Ad-SCAP(滴度为3.0×10~(11)PFU/m L)。RT-PCR和Western blot结果表明:siSCAP和Ad-SCAP能分别有效抑制和增强ATDC5细胞中SCAP的表达。流式细胞仪检测结果表明:与正常组和空病毒组比较,si SCAP腺病毒处理组S期细胞比例升高15.45%和16.07%(P0.05),Ad-SCAP组比例降低14.27%和13.45%(P0.05);siSCAP组细胞凋亡率降低13.10%和11.50%(P0.05),Ad-SCAP组升高10.51%和10.17%(P0.05)。Western blot检测结果与流式细胞仪检测结果一致。结论成功构建SCAP腺病毒;敲低SCAP能促进ATDC5细胞增殖并抑制凋亡;过表达SCAP则抑制增殖、促进凋亡。
【作者单位】： 重庆医科大学基础医学院细胞生物学与遗传学教研室;
【关键词】： 固醇调节元件结合蛋白裂解激活蛋白 重组腺病毒 ATDC细胞 细胞凋亡
【基金】：国家自然科学基金面上项目(81371928,81171697) 教育部新世纪优秀人才支持计划(NECT-12-1090)~~
【分类号】：R363
【正文快照】：

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本文编号：744483