FILIP-1L蛋白的原核表达及多克隆抗体制备

发布时间：2017-08-27 09:01

  本文关键词：FILIP-1L蛋白的原核表达及多克隆抗体制备

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【摘要】：目的:表达、纯化GST-FILIP-1L融合蛋白,制备FILIP-1L多克隆抗体。方法:pGEX-4T3-FILIP-1L重组质粒转化E.coliBL21大肠杆菌,IPTG诱导GST-FILIP-1L融合蛋白表达,Glutathion Sepharse 4B纯化GST-FILIP-1L融合蛋白。将纯化的GST-FILIP-1L融合蛋白免疫新西兰大耳白兔,制备FILIP-1L多克隆抗体,用ELISA方法检测多克隆抗体效价,Western blot检测多克隆抗体与FILIP-1L蛋白、细胞转染FILIP-1L蛋白及细胞FILIP-1L蛋白的结合能力。结果:在大肠杆菌中诱导出高表达的FILIP-1L融合蛋白,经Glutathion Sepharse 4B纯化后免疫新西兰大耳白兔,获得了高效价的抗FILIP-1L多克隆抗体,亲和层析获得纯度较高的多克隆抗体,WB检测显示多克隆抗体能够与FILIP-1L蛋白、293细胞转染FILIP-1L蛋白及肝癌细胞FILIP-1L蛋白结合。结论:成功表达、纯化了GST-FILIP-1L融合蛋白,制备了高效价的抗FILIP-1L多克隆抗体,为研究FILIP-1L蛋白生物学功能提供了有用的实验工具。
【作者单位】： 抗体药物河南省工程实验室 河南大学医学院细胞与分子免疫学实验室;
【关键词】： FILIP-L 融合蛋白 多克隆抗体
【基金】：国家自然科学基金资助项目(No.30971508)
【分类号】：R392.11
【正文快照】： 肿瘤细胞的迁移性与肿瘤侵袭、转移相关[1,2],肿瘤转移是肿瘤患者死亡的重要原因,因此肿瘤侵袭及迁移的机制研究与临床肿瘤治疗策略的发展密切相关。FILIP-1L(Filamin A interacting protein 1-like,FILIP-1L;previously known as down-regulated inovarian cancer 1,DOC1)是

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本文编号：745122