NK92细胞经非溶酶体途径快速生成并释放35kD颗粒酶B至靶细胞

发布时间：2017-08-29 09:00

  本文关键词：NK92细胞经非溶酶体途径快速生成并释放35kD颗粒酶B至靶细胞

  更多相关文章： 颗粒酶B NK细胞 分泌型溶酶体 细胞凋亡

【摘要】：目的探讨NK92细胞能否经非分泌型溶酶体途径分泌颗粒酶B(GZB)以及其可能的分泌机制。方法 NK92细胞作为细胞模型,经佛波酯(PMA)和离子霉素(ION)活化后4 h内,采用免疫荧光染色和胶体金标记免疫电镜技术检测NK92细胞胞质中蛋白合成功能被抑制前后相对分子质量(M_r)35 000和32 000 GZB的含量及其分布情况;采用Western blot法检测分离纯化分泌型溶酶体(SL)及不含溶酶体胞质中的GZB种类;通过EDTA抑制溶酶体的胞吐来阻断M_r32 000 GZB的释放,观察活化后NK92细胞上清中的M_r35 000 GZB含量;将活化的NK92细胞与K562细胞共培养,观察M_r35 000 GZB能否进入K562细胞;观察活化后NK92细胞的死亡率,并检测其分泌M_r35 000 GZB的酶活性。结果 NK92细胞PMA/ION刺激4 h后,在SL外的胞质中生成大量GZB,M_r为35 000区别于SL内GZB的M_r32 000。经免疫电镜和免疫荧光染色进一步显示,这些GZB位于溶酶体外的小囊泡内。同时,M_r35 000 GZB能被分泌至细胞外。进一步检测发现受到刺激的NK92细胞在SL外的胞质中同时出现GZB/丝氨酸蛋白酶抑制剂9(serpinb9)复合物以及M_r35 000 GZB,但死亡率未上升,与之相应的是SL内的GZB具有酶活性,SL外的M_r35 000 GZB为酶原形式,表明M_r35 000 GZB并非由SL漏出。结论人NK细胞内存在SL外无酶活性的M_r35 000 GZB,以非溶酶体途径快速生成方式分泌至细胞外,提供了部分细胞外的GZB。
【作者单位】： 湖北中医药大学检验学院;华中科技大学同济医学院免疫学系;
【关键词】： 颗粒酶B NK细胞 分泌型溶酶体 细胞凋亡
【基金】：国家自然科学基金青年项目(81202331)
【分类号】：R392
【正文快照】： 颗粒酶B(granzyme B,GZB)是丝氨酸蛋白酶家族的主要效应分子,在颗粒酶介导的靶细胞凋亡机制中起核心作用,主要来源于杀伤性淋巴细胞,包括自然杀伤(natural killer,NK)细胞和细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocytes,CTL)[1]。CTL内GZB以酶原的形式合成,经内质网加工,并将其

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 吴伟全;王思捷;李元歌;何香红;王永存;吴平;;激光扫描共聚焦显微镜及透射电镜观察肺癌A549细胞亚细胞结构溶酶体的对比分析[J];临床医学工程;2013年06期

2 周裕德;;脂质体用于溶酶体累积病的治疗[J];国外医学(分子生物学分册);1979年03期

3 张素娟;用吖叮橙显示动脉粥样硬化灶中溶酶体的方法[J];第一军医大学学报;1983年03期

4 李昌吉;;苯系物作业工人淋巴细胞中溶酶体的细胞化学改变[J];预防医学情报;1987年02期

5 亢继文;肖祥铭;;大鼠肾脏溶酶体的分离[J];辐射防护通讯;1987年03期

6 杨恬;生后1至90天大白鼠肝细胞溶酶体的年龄性改变[J];第三军医大学学报;1985年02期

7 罗深秋,肖焕才,任力,刘连璞,朴英杰;线状溶酶体和圆形溶酶体结构关系的电镜细胞化学观察[J];第一军医大学学报;1993年01期

8 李莉，石玉秀;线状溶酶体及其细胞生物学特性[J];解剖科学进展;1995年02期

9 陈平;王勇;文小玲;宋精玲;林萍;杨承纲;刘美玉;李维波;;中晚期乳腺浸润性导管癌癌线粒体及溶酶体的体视学分析[J];中国医学物理学杂志;2007年03期

10 李兵仓,王启民;生后1至90天内不同年龄大鼠肝细胞溶酶体酸性磷酸酶的观察[J];第三军医大学学报;1986年02期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 苏黎;崔宗杰;;溶酶体可作为可重建性钙库调节胞浆钙信号的产生[A];中国细胞生物学学会2005年学术大会、青年学术研讨会论文摘要集[C];2005年

2 龙鼎新;伍一军;;神经病靶酯酶的自噬-溶酶体途径降解研究[A];中国毒理学会生化与分子毒理专业委员会第六届全国学术会议、中国毒理学会遗传毒理专业委员会第五届全国学术会议、广东省预防医学会卫生毒理专业委员会学术会议、广东省环境诱变剂学会学术会议论文汇编[C];2008年

3 吴选俊;李柱;吴淑琪;韩家淮;杨柳;韩守法;;含有罗丹明衍生物的荧光探针用于溶酶体成像的研究[A];第八届全国化学生物学学术会议论文摘要集[C];2013年

4 李柱;吴淑琪;韩家淮;韩守法;;含有酸激发罗丹明衍生物的pH探针用于溶酶体酸度的研究[A];中国化学会第28届学术年会第3分会场摘要集[C];2012年

5 易静;张蕙心;张岚;汤雪明;;溶酶体在垂体-肾上腺皮质激素分泌调节中的作用[A];中国细胞生物学学会第五次会议论文摘要汇编[C];1992年

6 肖义;于海波;王璐;叶智伟;张新富;;溶酶体定位的荧光分子探针[A];第八届全国化学生物学学术会议论文摘要集[C];2013年

7 范艳斌;李春炎;李富友;陈道勇;;磷酸酶响应的纳米探针在溶酶体特异性成像方面的应用[A];2013年全国高分子学术论文报告会论文摘要集——主题H：医用高分子[C];2013年

8 李伯勤;辛华;李峥;;溶酶体发生的Flash动画表达与教学应用[A];中国细胞生物学学会2005年学术大会、青年学术研讨会论文摘要集[C];2005年

9 赵一蓉;李银辉;杨荣华;;纳米孔道实验室:目标物和pH双刺激响应的溶酶体Cu~(2+)传感器[A];中国化学会第29届学术年会摘要集——第04分会：纳米生物传感新方法[C];2014年

10 李平;肖海滨;张雯;张卫;王慧;刘璐;刘伟;唐波;;用于溶酶体内氯离子定量荧光比率成像的单激发-双最大发射荧光探针[A];中国化学会第29届学术年会摘要集——第03分会：分析可视化及交叉学科新方法[C];2014年

中国重要报纸全文数据库 前5条

1 叶盛楠;北京协和医院儿科成功绘制我国溶酶体疾病谱[N];中国医药报;2014年

2 ;耶鲁大学科学家解释细胞防护机制[N];中国高新技术产业导报;2001年

3 副主任医师 龙安民;激素与维生素合用可减轻副作用[N];大众卫生报;2007年

4 朱本浩;激素与维生素的“天仙配”[N];保健时报;2009年

5 博恩;激素与维生素的最佳“搭档”[N];中国医药报;2011年

中国博士学位论文全文数据库 前4条

1 田雪君;钙离子电压门控通道调节溶酶体与内涵体和自噬体融合及其维持神经系统稳态平衡的功能研究[D];浙江大学;2015年

2 刘波;乙型肝炎病毒通过干扰溶酶体成熟抑制细胞自噬性降解途径[D];浙江大学;2013年

3 王璐;靶向细胞溶酶体或染色质的粘度荧光探针[D];大连理工大学;2014年

4 黄娟;细胞毒性脑水肿的发生发展过程中AQP4内化和溶酶体分选现象及其机制的研究[D];重庆医科大学;2014年

，

本文编号：752403