一株鼠毒素基因缺失突变鼠疫耶尔森氏菌株的构建和鉴定

发布时间：2017-09-09 14:31

  本文关键词：一株鼠毒素基因缺失突变鼠疫耶尔森氏菌株的构建和鉴定

  更多相关文章： 鼠疫耶尔森氏杆菌 鼠毒素 基因敲除

【摘要】：目的构建鼠疫耶尔森氏杆菌减毒疫苗株鼠毒素基因缺失的突变菌株,建立鼠疫耶尔森氏杆菌的基因敲除方法,为研究鼠疫耶尔森氏杆菌基因奠定基础。方法选择1株鼠疫耶尔森氏杆菌减毒疫苗株(菌株号为0614F)为实验菌株。利用Artemis软件阅读鼠疫菌91001株基因序列,查找并导出鼠毒素(Ymt)及其两侧100个基因序列。设计同源区突变盒引物和鉴定引物,采用λ-Red系统一步法敲除0614F鼠毒素编码基因并进行鉴定。结果质粒提取试剂盒提取Escherichia coli DH5α培养物pKD46质粒50μl,浓度为121.1ng/μl;同源区突变盒引物扩增含有氯霉素抗性基因菌株DNA,PCR产物进行1%琼脂糖电泳凝胶电泳鉴定后切胶,用胶回收试剂盒提取氯霉素线性突变盒50μl,浓度为724ng/μl;0614F菌株经两次电转化获得具有氨苄青霉素和氯霉素抗性的菌株,用相应鉴定引物进行PCR鉴定,获得菌株鉴定为鼠毒素基因缺失株0614F-△Ymt。结论应用基因敲除技术对鼠疫耶尔森氏杆菌鼠毒素基因定向突变成功,为青藏高原型鼠疫菌株新型疫苗研究奠定了实验基础。
【作者单位】： 青海省地方病预防控制所青海省鼠疫防控与研究重点实验室;青海省地方病预防控制所地方病预防控制科;
【关键词】： 鼠疫耶尔森氏杆菌 鼠毒素 基因敲除
【基金】：青海省自然科学基金项目(No.2013-Z-906)
【分类号】：R378.61
【正文快照】： *?**?青海省是全国甚至全球鼠疫的高发地,鼠疫自然疫源地长期存在且复杂而活跃,动物间鼠疫流行猛烈,时常波及人类,进入21世纪后的15年内就发生了人间鼠疫13起,发病37人,死亡16人,1954-2012***年分离的鼠疫菌中93.26%为强毒株[1]。青海地区鼠疫具有发病急、病程短、鼠疫菌的毒

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前5条

1 王光明;;鼠疫菌鼠毒素在动物实验上的免疫活性[J];地方病译丛;1981年04期

2 王洪喜;;111鼠毒素中毒的大白鼠体内环状核苷酸、前列腺素含量以及血小板聚集[J];地方病译丛;1992年04期

3 王献德;;鼠疫菌荚膜抗原、鼠毒素和内毒素的结构——功能特性和生物学活性[J];地方病译丛;1988年03期

4 雷刚,热娜·吐尔地,楚定成,阿扎提·热合木,徐秉臣;鼠疫菌弱毒株粗制鼠毒素含量及其SDS-PAGE电泳图形比较[J];地方病通报;1997年02期

5 ;[J];;年期

，

本文编号：820994