日本血吸虫热休克因子基因结构特征及其可变剪切亚型分析研究

发布时间：2017-09-09 23:40

  本文关键词：日本血吸虫热休克因子基因结构特征及其可变剪切亚型分析研究

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【摘要】：目的克隆、鉴定日本血吸虫热休克因子(Sj-hsf),并分析其基因结构特征和可变剪切亚型。方法以日本血吸虫尾蚴感染新西兰白兔,42 d后剖杀,以灌注法收集雌虫、雄虫及感染兔肝脏,以Trizol法提取总RNA。以RT-PCR扩增日本血吸虫雌虫、雄虫、虫卵总RNA,获得Sj-hsf开放阅读框(ORF)全长片段和Sj-hsf可变剪切区域片段,并进行克隆、酶切及测序鉴定。用DNAMAN 8.0、Inter Pro、Mega 6结合日本血吸虫和曼氏血吸虫基因组数据库以及Gen Bank等网络分析平台,分析Sj-hsf的基因结构特征、功能结构域、可变剪切模式以及不同物种间HSF序列的同源性和进化树。结果自雌虫、雄虫、虫卵扩增获得靶片段,并克隆获得阳性重组质粒,其中含Sj-hsf ORF的p BSj HSFf-F、p BSj HSFf-M、p BSj HSFf-E以及含可变剪切片段的p BSj HSFs-F、p BSj HSFs-M、p BSj HSFs-E,酶切及测序鉴定正确。序列分析显示Sj-hsf具有3种剪切亚型:Sj-hsf-isoform1(2 050 bp)、Sj-hsf-isoform2(2 086 bp)、Sj-hsf-isoform3(2 111 bp),Gen Bank登录号分别为KU954546、KX119143、KX119144,均位于日本血吸虫基因组SJC-S000780,有8个外显子,在雌虫、雄虫和虫卵阶段3种亚型均存在,以Sj-hsf-isoform1表达量高。Sj-HSF-isoform1(671 aa)、Sj-HSF-isoform2(683 aa)具有HSF特征性DBD(DNA Binding Domain)、HR-A/B和HR-C结构域,Sj-HSF-isoform3(282 aa)提前终止,无HR-C结构域。进化树分析表明Sj-HSF三种剪切亚型隶属HSF1,与曼氏血吸虫HSF近源。结论日本血吸虫雌虫、雄虫、虫卵阶段均存在3种剪切亚型的HSF,以Sj-HSF-isoform1表达量高。本研究为进一步阐明Sj-HSF调控Sj-HSPs等应激防御体系的分子机制奠定了基础。
【作者单位】： 南方医科大学公共卫生学院病原生物学系暨广东普通高校新发传染病防治重点实验室;
【关键词】： 日本血吸虫 热休克反应 热休克因子 可变剪切 热休克蛋白
【基金】：国家自然科学基金(81071378、30872204) 广东省广州市对外科技合作专项(2012J5100026) 广东省大学生创新创业训练计划项目(201412121088)
【分类号】：R383.24
【正文快照】： 生物体受外界各种刺激,会引发一系列防御性反应,其中热休克反应(Heat stress response,HSR)在此应激防御过程中发挥重要作用。HSR体系包括感应系统和效应系统,感应系统包括细胞膜上钙离子通道激活和下游通路如ROS通路(ROS/redox signaling network)和MAPK通路激活,继而可引起

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