RIK蛋白的重组表达、多克隆抗体制备及其功能的初步研究

发布时间：2017-09-10 00:27

  本文关键词：RIK蛋白的重组表达、多克隆抗体制备及其功能的初步研究

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【摘要】：目的本研究从MHV68转化得到的小鼠B淋巴瘤细胞中筛选出一种功能尚未明确的蛋白质,暂时命名为RIK。通过对RIK基因克隆、表达和纯化并成功制备其多克隆抗体,并初步探讨其生物学功能,为该蛋白的进一步深入研究奠定基础。方法通过RT-PCR的方法检测B淋巴瘤细胞系和原代B细胞中的RIK m RNA水平,并扩增出RIK的基因片段,采用基因重组技术构建出RIK的原核表达载体,经诱导表达后,利用镍离子柱亲和纯化出RIK重组蛋白,免疫新西兰大耳兔,制备抗RIK多克隆抗体,ELISA和Western blot检测抗体灵敏度和特异性。最后,通过在过表达鼠源RIK的小鼠NIH3T12细胞中,进行MHV68病毒感染实验,初步确定其生物学功能。结果 RT-PCR检测发现RIK在B淋巴瘤细胞系中m RNA水平高于原代B细胞,并且成功构建人源和鼠源重组表达质粒p ET-28a(+)-h/m RIK,实现包涵体形式RIK蛋白的诱导表达纯化和抗体制备,SDS-PAGE和Western blot证实获得的抗RIK多克隆抗体与预期结果一致,能够特异地识别RIK蛋白。同时,研究发现,在小鼠NIH3T12细胞中过表达m RIK蛋白,能够有效的抑制MHV68对该细胞的感染。结论本研究成功实现了RIK的重组表达、抗体制备,并且发现RIK蛋白对于MHV68的感染具有十分有效的抑制作用,实现了对其功能的初步研究,并且为深入研究奠定了基础。
【作者单位】： 上海大学生命科学学院;中国科学院上海巴斯德研究所;
【关键词】： RIK RT-PCR 重组表达 多克隆抗体 MHV感染
【分类号】：R392.11
【正文快照】： gamma型疱疹病毒是一种双链DNA病毒,其成员遍及自然界,可感染包括人在内的多种哺乳动物,目前较为常见的病毒有感染人的EBV、KSHV、感染小鼠的MHV68 等。gamma型疱疹病毒的生物学特性主要包括:能在淋巴细胞中潜伏感染,可以产生淋巴增生性疾病,与淋巴组织和非淋巴组织肿瘤关系密

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本文编号：823655