嵌合γδ TCR结构域的αβ TCR分子的同源建模及真核表达

发布时间：2017-09-12 15:34

  本文关键词：嵌合γδ TCR结构域的αβ TCR分子的同源建模及真核表达

  更多相关文章： T细胞受体 蛋白结构预测 同源建模 融合基因

【摘要】：目的设计并构建嵌合γδTCR类免疫球蛋白(Ig)结构域的αβTCR分子,并在Jurkat T细胞中观察其表达。方法通过生物信息学分析确定TCR△Ig分子的融合位点;应用同源建模模拟嵌合TCRα和TCRβ蛋白的三维结构,并应用组合扩展方法(CE)对TCR△Ig分子与野生型TCR分子的蛋白骨架以及抗原识别活性部位进行空间结构比对和分析。采用重叠PCR法分别在TCRα△Ig和TCRβ△Ig的末端融合增强型青色荧光蛋白(ECFP)和增强型黄色荧光蛋白(EYFP),并分别克隆入质粒p IRES2-EGFP内部核糖体进入位点(IRES)的上下游。最后将重组表达质粒p IRES-TCRβ△Ig-EYFP/TCRα△Ig-ECFP转染Jurkat T细胞,共聚焦显微镜扫描分析该嵌合TCR分子的表达。结果 TCRα△Ig和TCRβ△Ig的同源建模及三维结构比对结果显示,相比于野生型TCR,该嵌合TCR的可变区(V)结构无改变并且抗原识别活性中心结构保持稳定。重组表达质粒经PCR鉴定及测序分析证明载体构建成功;并且共聚焦显微镜扫描结果显示嵌合TCR分子能定位于T细胞膜表面并正常表达。结论该嵌合TCR分子设计合理,能在Jurkat T细胞表面正常表达。
【作者单位】： 广东药科大学生命科学与生物制药学院广东省生物技术候选药物研究重点实验室;
【关键词】： T细胞受体 蛋白结构预测 同源建模 融合基因
【基金】：国家自然科学基金(31300737)
【分类号】：R392
【正文快照】： T细胞受体(T cell receptor,TCR)是T细胞表面能够识别和结合蛋白质抗原的特异性受体,在细胞免疫中发挥着重要的靶向性作用[1],TCR基因修饰的T细胞过继性免疫治疗显示了十分广阔的应用前景[2]。但由于外源TCR导入T细胞时,外源TCRα或β链与内源TCRβ或α链之间会相互识别配对形

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 陆宗超;王邦平;李振兴;;褐虾过敏原Cra c 8蛋白的结构分析和同源建模[J];食品科学;2012年09期

中国重要会议论文全文数据库 前2条

1 庄绪静;曹雅忠;李克斌;尹姣;;同源建模和分子对接方法的应用与发展[A];植保科技创新与病虫防控专业化——中国植物保护学会2011年学术年会论文集[C];2011年

2 杜红丽;凌飞;罗庆斌;张细权;;鸡HSP70蛋白三维结构的同源建模[A];中国动物遗传育种研究进展——第十五次全国动物遗传育种学术讨论会论文集[C];2009年

中国博士学位论文全文数据库 前1条

1 任菲;基于蛋白质聚类的同源建模结构预测研究[D];中南大学;2013年

中国硕士学位论文全文数据库 前2条

1 黄晓艳;计算机辅助抗癌药物设计和蛋白同源建模研究[D];兰州大学;2011年

2 吴国庆;几种蛋白质同源建模缺失值填充方法的研究[D];华北电力大学;2014年

，

本文编号：838054