重组腺病毒介导BMP-9及促红细胞生成素双基因共转染促进脂肪来源干细胞体外成骨的研究

发布时间：2017-09-12 20:46

  本文关键词：重组腺病毒介导BMP-9及促红细胞生成素双基因共转染促进脂肪来源干细胞体外成骨的研究

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【摘要】：目的探讨重组腺病毒介导BMP-9及促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)双基因共转染对脂肪来源干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)体外成骨分化的影响。方法取4月龄新西兰兔腹股沟脂肪组织,采用酶消化法与贴壁法分离培养ADSCs并鉴定其多向分化能力。将第3代ADSCs分为5组:A组为正常细胞,B组为空质粒转染细胞作为对照,C、D组分别采用BMP-9、EPO重组腺病毒转染细胞,E组采用BMP-9、EPO重组腺病毒共转染细胞。转染培养7 d后倒置相差显微镜观察各组细胞生长变化;计算48 h时病毒转染效率,14 d荧光显微镜下观察各组细胞荧光表达情况;14 d时Western blot检测各组细胞BMP-9及EPO蛋白表达。取转染培养14 d的5组细胞进行成骨诱导培养,于诱导培养3、7、14 d检测各组细胞ALP活性;3周时茜素红染色观察钙结节形成情况,实时荧光定量PCR检测骨桥蛋白(osteopontin,OPN)、骨钙素(osteocalcin,OCN)基因表达。结果转染培养7 d后倒置相差显微镜下见A、B组部分细胞变为椭圆形、圆形和不规则形;C、D组可见少量长梭形细胞;E组长梭形细胞明显增多,仅见少量圆形细胞。荧光显微镜下观察BMP-9、EPO及BMP-9/EPO重组腺病毒均能稳定转染ADSCs,转染效率为80%~93%。Western blot检测示E组BMP-9及EPO蛋白相对表达量显著高于其他组,差异有统计学意义(P0.05)。成骨诱导培养3、7、14 d时各组细胞ALP活性明显升高,E组优于其余各组(P0.05);3周时茜素红染色示E组钙结节数亦显著高于其余各组(P0.05),实时荧光定量PCR示E组OPN和OCN基因相对表达量明显高于其他组,C、D组高于A、B组,比较差异有统计学意义(P0.05)。结论重组腺病毒介导BMP-9及EPO基因均可转染ADSCs并稳定表达,双基因共转染后能显著促进成骨相关基因和蛋白的表达。
【作者单位】： 山东济宁口腔医院口腔颌面外科;山东济宁口腔医院口腔修复科;四川大学华西口腔医院颌面外科;上海闵行区牙病防治所口腔外科;
【关键词】： 脂肪来源干细胞 重组腺病毒 BMP- 促红细胞生成素 成骨分化 兔
【基金】：国家自然科学基金资助项目(81170935)~~
【分类号】：R329.2
【正文快照】： 脂肪来源干细胞(adipose-derived stem cells,AD SCs)因具有自我更新、多向分化和低免疫原性等优势,成为组织工程研究热点[1-2]。BMP-9是TGF-β家族成员之一,能够调节干细胞向骨、软骨、肌腱和脂肪等组织的分化[3-5]。促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)是一种低氧诱导激素,

【参考文献】

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【共引文献】

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【相似文献】

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本文编号：839452