十二指肠钩虫抗凝肽AduNAP1的原核表达及其抗凝活性研究

发布时间：2017-09-13 05:40

  本文关键词：十二指肠钩虫抗凝肽AduNAP1的原核表达及其抗凝活性研究

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【摘要】：目的分离、克隆十二指肠钩虫抗凝肽AduNAP1基因,在大肠埃希菌中重组表达AduNAP1,并检测其抗凝活性。方法以十二指肠钩虫成虫cDNA为模板,PCR扩增AduNAP1成熟肽编码序列,并克隆、连接到表达质粒pET32a-sumo,构建原核表达载体pET32a-sumo/AduNAP1。重组载体转入到大肠埃希菌BL21(DE3)中,用IPTG诱导表达。重组产物经Ni亲和层析后用SUMO蛋白酶酶切融合伴侣,纯化获得重组目的多肽。用SDS-PAGE分析蛋白表达及纯化情况,用凝血时间法(PT及aPTT)检测重组多肽的抗凝活性。结果扩增并克隆AduNAP1成熟肽编码序列,构建的原核表达载体pET32a-sumo/AduNAP-1转化大肠埃希菌表达rAduNAP1。纯化的rAduNAP1能延长PT及aPTT,但延长PT作用更为显著,其延长2倍PT及aPTT时间所需的浓度分别约为142nmol/L及406nmol/L。结论构建rAduNAP1表达载体,其表达产物具有较强抗凝活性,为进一步了解AduNAP1的生物学功能及作为抗凝新药开发应用奠定了基础。
【作者单位】： 广东医科大学寄生虫学暨临床寄生虫检验学教研室;广东医科大学药理学教研室;
【关键词】： 十二指肠钩虫 抗凝肽 原核表达 抗凝活性
【基金】：国家自然科学基金项目(No.31101639) 广东省自然科学基金重点项目(No.S2013020012893) 广东省高等学校人才引进专项(No.2050205)
【分类号】：R383.13
【正文快照】： *?**?钩虫(hookworm)是人体及动物常见寄生线虫,寄生于人体的主要有十二指肠钩虫(Ancylostoma du-odenale)及美洲钩虫(Necator americanus)。钩虫寄生于肠道,主要危害是引起贫血。钩虫对人类健康危害严重,曾位列我国5大寄生虫之一,目前估计全球感染人数约4.4亿[1]。钩虫寄生引

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1 陈桂光;沙人珏;曾国琦;苏庆平;洪凌仙;;十二指肠钩虫感染金色地鼠(Mesocricetus auratus)初步报道[J];福建医大学报;1980年00期

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6 ;[J];;年期

，

本文编号：841855