弧菌外膜蛋白Ompk基因序列分析及其多克隆抗体的制备

发布时间：2017-09-14 08:14

  本文关键词：弧菌外膜蛋白Ompk基因序列分析及其多克隆抗体的制备

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【摘要】：弧菌外膜蛋白(outer membrane protein,OMP)OmpK不仅可激发机体的体液免疫和细胞免疫,而且可在不同血清型菌株之间产生免疫交叉反应。本研究利用克隆测序和查找Gen Bank获得20株弧菌的Ompk基因序列并构建Ompk系统进化树,对比分析20株弧菌Ompk基因序列;利用原核表达系统表达野生株Vibrio parahaemolyticus B的OmpK,纯化OmpK后制备兔多克隆抗体;采用酶联免疫吸附分析法和蛋白质印迹法(Western-blotting)分别检测抗体效价和特异性。系统进化树和基因序列比对结果显示Ompk基因在弧菌中高度保守,核苷酸序列相似性在77%以上;原核表达系统成功表达了弧菌OmpK,蛋白经纯化后成功制备的兔多抗效价达1∶16 000;Western-blotting实验证实抗体具有很好的特异性;OmpK多克隆抗体在弧菌中普遍存在免疫交叉性。因此,弧菌Ompk基因序列分析及其抗体研制,不仅为弧菌快速免疫学检测提供可能性,也为以OmpK为靶点的水产疫苗研制奠定了基础。
【作者单位】： 上海理工大学医疗器械与食品学院;
【关键词】： 弧菌 Ompk 原核表达 纯化 多克隆抗体 免疫学检测
【基金】：国家自然科学基金面上项目(31371776) “科技创新行动计划”长三角科技联合攻关领域项目(15395810900) 上海市研究生教育创新计划项目
【分类号】：R392
【正文快照】： 引文格式:丁承超,谢曼曼,曾海娟,等.弧菌外膜蛋白Ompk基因序列分析及其多克隆抗体的制备[J].食品科学,2016,37(23):141-146.DOI:10.7506/spkx1002-6630-201623024.http://www.spkx.net.cnDING Chengchao,XIE Manman,ZENG Haijuan,et al.Gene sequence analysis and polyclonal

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本文编号：848895