抗CD133纳米抗体的分离与鉴定

发布时间：2017-09-15 07:12

  本文关键词：抗CD133纳米抗体的分离与鉴定

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【摘要】：[目的]获得骆驼来源的与人CD133抗原特异性结合的纳米抗体。[方法]从3峰新疆双峰驼外周血中分离淋巴细胞,采用巢式PCR扩增获得cDNA并构建VHH天然噬菌体展示文库。包被CD133-606于ELISA板,对天然文库进行3轮亲和筛选,菌落PCR和基因测序确定能结合CD133的候选克隆。挑选重复序列VHH克隆构建到pET28a并转BL21用IPTG诱导表达。IMAC方法纯化重组VHH抗体蛋白,Western Blot和ELISA检测与CD133的抗原结合性。[结果]从109淋巴细胞中构建了库容为1.4×109cfu的噬菌体展示文库,Western Blot及ELISA结果显示重复4次核苷酸序列的VHH-13的纳米抗体能与CD133-606有较好的结合活性。[结论]通过对VHH天然展示文库的亲和筛选及鉴定,成功获得了能与人重组CD133胞外区特异结合的纳米抗体。
【作者单位】： 新疆大学生命科学与技术学院新疆生物资源基因工程重点实验室;
【关键词】： CD 纳米抗体 天然噬菌体展示文库 亲和筛选 ELISA
【基金】：国家自然科学基金项目(“骆驼单域抗体框架区作为小分子抗体通用移植骨架的研究”,No.31370933)资助
【分类号】：R392
【正文快照】： CD133是一个五次跨膜糖蛋白,在多种恶性肿瘤细胞以及肿瘤干细胞表面高表达,是鉴定肿瘤干细胞最常用的标志物之一。目前,靶向CD133以清除肿瘤干细胞(CSC)并降低肿瘤的耐药性已成为开发针对CSC治疗的手段之一[1]。但当前获得的抗CD133抗体,包括AC133、293C3和AC141等主要用于鉴

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本文编号：855046