马骨髓间充质干细胞系的建立及向软骨细胞诱导分化的研究

发布时间：2017-09-15 16:22

  本文关键词：马骨髓间充质干细胞系的建立及向软骨细胞诱导分化的研究

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【摘要】：本研究首先建立了马骨髓间充质干细胞系,对其生物学特征和干细胞特性进行了鉴定(CD34、CD44、CD45、CD90、CD105、SOX2、Nanog),并在特定的软骨分化培养基中进行培养,使其分化为软骨细胞,经组织学阿尔新蓝染色、对软骨细胞的特异表达基因Collagen type Ⅱ进行实时定量PCR鉴定后,发现在经过诱导分化的细胞中出现了类似于软骨细胞的形态特征,同时表达了软骨的特异基因。本实验的主要研究结果如下：1、在该实验中建立了马骨髓间充质干细胞系,发现间充质干细胞的形态均呈长梭型,类似于成纤维细胞,通过对该细胞系的P3细胞计数后,发现生长曲线呈“S”型,经计算,细胞倍增时间为31h。2、对骨髓间充质干细胞的P3代细胞进行PCR分析,发现骨髓间充质干细胞表达了转录因子SOX2、NANOG,以及细胞表面特异性基因CD14、D90、 CD105,但不表达造血干细胞因子CD34和白细胞因子CD45。3、将骨髓间充质干细胞分别在诱导培养液和普通培养液中进行培养,发现经诱导培养的分化组细胞形态发生了明显的变化,呈“石头状”,而普通培养的对照组细胞形态没有任何变化。接着对两组细胞分别进行阿尔新蓝染色的组织学鉴定,发现分化组细胞被染成了蓝色,说明有蛋白聚糖的分泌,而对照组细胞没有着色；最后以Collagen type Ⅱ为目的基因、18S为内参基因,对两组细胞进行实时定量PCR鉴定,结果显示,分化后的细胞有Col的表达,但对照组细胞没有。综上所述,该实验建立了马骨髓间充质干细胞系,并将其诱导分化为软骨细胞。本研究为马运动损伤在细胞的临床治疗实践中提供了科学的理论依据和技术方法,同时也为人类临床医学的细胞治疗提供了一定的方法和借鉴。
【关键词】：马 骨髓间充质干细胞 细胞培养 诱导分化 软骨细胞
【学位授予单位】：内蒙古农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R329.2
【目录】：

• 摘要3-4
• Abstract4-8
• 缩略语表8-9
• 1 引言9-14
• 1.1 间充质干细胞的研究进展9-12
• 1.1.1 干细胞综述9
• 1.1.2 间充质干细胞综述9-10
• 1.1.3 骨髓间充质干细胞的生物学特性10-11
• 1.1.4 骨髓间充质干细胞的多向诱导分化11-12
• 1.2 间充质干细胞的应用及存在的问题12-13
• 1.2.1 间充质干细胞的应用12-13
• 1.2.2 间充质干细胞的研究展望13
• 1.3 本研究的目的意义及主要内容13-14
• 1.3.1 研究的目的及意义13
• 1.3.2 主要研究内容13-14
• 2 马骨髓间充质干细胞的分离与培养14-23
• 2.1 材料与方法14-17
• 2.1.1 实验材料14
• 2.1.2 实验试剂14
• 2.1.3 实验仪器及耗材14
• 2.1.4 实验方法14-17
• 2.2 实验结果与分析17-21
• 2.2.1 马BMSC的体外分离培养17-19
• 2.2.2 细胞生长曲线的绘制及倍增时间的计算19-20
• 2.2.3 马BMSC干细胞转录因子基因的检测20-21
• 2.3 讨论21-22
• 2.3.1 马BMSCs的分离与培养21-22
• 2.3.2 细胞冻存22
• 2.3.3 马BMSCs的生物学特性22
• 2.4 小结22-23
• 3 马骨髓间充质干细胞向软骨诱导分化及鉴定23-37
• 3.1 材料与方法23-27
• 3.1.1 实验材料23
• 3.1.2 实验试剂23
• 3.1.3 实验仪器及耗材23
• 3.1.4 实验方法23-27
• 3.2 实验结果与分析27-35
• 3.2.1 形态学鉴定27-29
• 3.2.2 组织学鉴定29-30
• 3.2.3 基因鉴定30-32
• 3.2.4 实时定量PCR32-35
• 3.3 讨论35-36
• 3.4 小结36-37
• 4 结论37-38
• 致谢38-39
• 参考文献39-43
• 作者简介43

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