利用piggyBac转座子构建小鼠诱导性多能干细胞及其鉴定

发布时间：2017-09-20 02:09

  本文关键词：利用piggyBac转座子构建小鼠诱导性多能干细胞及其鉴定

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【摘要】：目的:利用piggyBac转座子载体携带鼠源Oct4、Sox2、Klf4和c-Myc 4个核转录因子,重编程胎鼠成纤维细胞(MEFs)为诱导性多能干细胞(iPSCs),并探讨其作用效果。方法:分离Oct4-GFP小鼠的MEFs,将携带鼠源Oct4、Sox2、Klf4、c-Myc等4个基因的piggyBac转座子转入至MEFs;观察iPSCs克隆形成过程的形态表现;分析iPSCs染色体组成,评价iPSCs的核型变化。RT-PCR法检测小鼠iPSCs中胚胎干细胞(ESCs)相关基因Oct4、Nanog和FGF4的表达;免疫荧光、碱性磷酸酶染色和流式细胞术检测小鼠iPSCs中SSEA-1和Nanog蛋白表达。将iPSCs接种到NOD-SCID小鼠腹股沟进行畸胎瘤实验,4周后取畸胎瘤制备组织切片进行HE染色,观察组织分化情况。结果:通过piggyBac转座子成功构建iPSCs,其具有正常的核型,形态与小鼠ESCs相似,克隆边界清晰、呈圆形或卵圆形,克隆内细胞致密、核大。RT-PCR和免疫荧光染色分析,iPSCs可表达多能性基因和蛋白(Oct4、Sox2、Kif4和c-Myc)。在免疫缺陷小鼠体内接种iPSCs可形成具有3个胚层组织的畸胎瘤。结论:以piggyBac转座子为载体将Oct4、Sox2、Klf4和c-Myc 4个转录因子基因导入MEFs,可以成功诱导MEFs成为具有ESCs特征的正常核型iPSCs。
【作者单位】： 暨南大学第二临床医学院广东省深圳市人民医院干细胞与细胞治疗重点实验室;
【关键词】： piggyBac 重编程 小鼠胚胎纤维细胞 诱导性多能干细胞
【基金】：国家自然科学基金资助课题(81270857) 广东省科技厅自然科学基金资助课题(S2013010014832) 广东省深圳市科技创新委员会科技计划项目资助课题(GJHZ20120618153934353,JCYJ2061853743791)
【分类号】：R329.2
【正文快照】： Evans等[1]第一次从小鼠囊胚的内细胞团中分离培养出多潜能性的胚胎干细胞(embryonic stemcells,ESCs),随后根据其分化的全能性展开了各项研究。研究[2-3]显示:ESCs可分化成具有神经细胞、心肌细胞和胰岛β细胞等具有功能的体细胞,为阿尔茨海默症、心肌梗死和糖尿病等疾病的细

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