结核分枝杆菌Hsp65-Esat6与hGM-CSF联合DNA疫苗的构建与体外研究

发布时间：2017-09-21 12:46

  本文关键词：结核分枝杆菌Hsp65-Esat6与hGM-CSF联合DNA疫苗的构建与体外研究

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【摘要】：目的:应用分子生物学技术,构建p IHsp65-Esat6GM共表达质粒,并在真核细胞中表达.方法:以p EGHsp65Esat-6为模板经聚合酶链反应(PCR)扩增出Hsp65-Esat6基因,同时从质粒p ORF-h GM-CSF中扩增出基因佐剂h GM-CSF,分别克隆到真核表达载体p IRES的多克隆位点A(MCSA)和B(MCSB)中,构建p IHsp65-Esat6GM共表达质粒,并转染Hep G-2细胞中表达和检测.结果:酶切鉴定提示插入的基因片段大小分别为1.93 kb和0.47kb,测序分析表明克隆的Hsp65-Esat6和人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(h GM-CSF)序列与Gen Bank上公布序列完全一致;Western-bolt检测到Hsp65-Esat6融合蛋白相对分子质量(Mr)为75 000 k Da;RT-PCR方法检测出p IGM,p IHsp65GM和p IHsp65-Esat6GM转染组细胞均有h GM-CSF mRNA表达,三组细胞中h GM-CSF基因mRNA的表达量差异无统计学意义(P0.05).ELISA方法检测到p IHsp65-Esat6GM转染组细胞培养上清中h GM-CSF的表达,且与空载体对照组比较差异有统计学意义(P0.01).结论:成功构建和表达了p IHsp65-Esat6GM质粒,为研制优于卡介苗(BCG)的新型抗结核病的DNA疫苗奠定了基础.
【作者单位】： 暨南大学医学院微生物学与免疫学教研室;
【关键词】： 热休克蛋白kd-早期分泌性抗原靶kd 人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子 双顺反子 基因佐剂
【基金】：国家“十二五”科技重大专项(2014ZX10003002;2012ZX10004903)
【分类号】：R392
【正文快照】： 结核病(tuberculosis,TB)是由结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)感染引起的传染性疾病,每年全球大约有一百五十万人死于结核病,并且每年有接近九百万的新增病例[1].卡介苗(ba-cille calmette-guerin,BCG)是目前被广泛用于预防结核病的减毒活疫苗,但其免疫效果仍不

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本文编号：894618