一种发育期皮质脊髓投射神经细胞基因表达谱的研究方法

发布时间：2017-09-21 19:41

  本文关键词：一种发育期皮质脊髓投射神经细胞基因表达谱的研究方法

  更多相关文章： 皮质脊髓投射神经元 激光捕获显微切割技术 发育 基因表达谱

【摘要】：皮质脊髓投射神经细胞(cortico-spinal projection neurons,CSPN)对于大脑的功能非常重要,但目前还缺乏研究小鼠发育期CSPN基因表达谱的有效方法。将出生后2 d(P2)的小鼠在脊髓交叉处注射逆行标记的神经示踪剂,并在P8时进行激光显微切割。提取捕获细胞的RNA并线性放大,而后利用定量PCR进行皮层标记基因的验证,线性放大后的RNA与大脑皮层组织的RNA相比,第五皮层标记基因Fezf2(Fez family zinc fi nger 2)表达明显升高,第四、第六皮层标记基因Rorβ(RAR related orphan receptorβ)、Foxp2(forkhead box P2)的表达相对较低。之后,进行小鼠基因芯片表达谱检测,通过基因功能富集度分析发现,在CSPN中大多数富表达的基因都与G蛋白偶联受体信号通路以及运动行为有关。而且,染色质的修饰和编排相关基因在CSPN里也有富集表达。通过定量PCR进一步验证了芯片中CSPN的富集基因,结果发现,Meg3(maternally expressed gene 3)等7个基因在大脑第五皮层表达丰富。该研究将在体神经细胞荧光标记、激光捕获显微切割、RNA线性放大、基因芯片及定量PCR等多种技术结合起来,提供了一种研究发育期小鼠CSPN基因表达谱的方法。
【作者单位】： 卫生部视觉科学重点实验室温州医科大学眼视光学院;丽水市人民医院检验科温州医科大学附属第六医院;丽水市中心医院眼科温州医科大学附属第五医院;
【关键词】： 皮质脊髓投射神经元 激光捕获显微切割技术 发育 基因表达谱
【基金】：国家自然科学基金(批准号:31500850) 浙江省自然科学基金(批准号:LY15H090020;LQ16H120001) 丽水市公益性技术应用项目(批准号:2014JYZB03)资助的课题~~
【分类号】：R338
【正文快照】： linearly and verified through the marker genes of each layer by q PCR.While layer V marker gene Fezf2(Fezfamily zinc fi nger 2)was increased,layer IV maker gene Rorβ(RAR related orphan receptorβ)and layer VI makergene Foxp2(forkhead box P2)were decreas

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