IRF3 shRNA腺病毒包装及其对RAW264.7细胞IRF3表达的抑制效应

发布时间：2017-09-23 14:15

  本文关键词：IRF3 shRNA腺病毒包装及其对RAW264.7细胞IRF3表达的抑制效应

  更多相关文章： 干扰素调节因子 短发夹RNA 腺病毒 病毒包装 RAW.细胞

【摘要】：目的重组并包装干扰素调节因子3(interferon regulator factor 3,IRF3)短发夹RNA(short hairpin RNA,sh RNA)腺病毒,研究该病毒对RAW264.7细胞IRF3基因表达及对细胞增殖活性和吞噬功能的影响。方法采用酶切和连接方法构建p Adeno-U6-CMV-EGFP-IRF3 sh RNA质粒;借助Ad MaxTM病毒包装系统完成IRF3基因干扰腺病毒的重组与包装;IRF3基因表达分别采用real-time PCR和Western blot分析方法检测;RAW264.7细胞的增殖活性和吞噬功能分别采用CCK8分析和吞墨试验检测。结果 IRF3基因的干扰片段及对照序列被正确插入p Adeno-U6-CMV-EGFP质粒AgeⅠ和Eco RⅠ酶切位点之间,经PCR扩增及DNA测序证实;RAW264.7细胞组成性表达IRF3基因,针对IRF3基因后部序列的干扰腺病毒Y2147明显抑制了IRF3 m RNA和蛋白质的表达,而针对IRF3基因前部及中部序列及对照序的干扰腺病毒对IRF3的表达无明显沉默或封闭效应;腺病毒Y2147对RAW264.7细胞的增殖活性及吞噬功能无明显不良影响。结论成功构建并包装了IRF3 sh RNA腺病毒,该病毒能有效抑制RAW264.7细胞IRF3 m RNA和蛋白表达,且对细胞的增殖活性和吞噬能力无不良影响。
【作者单位】： 南京医科大学附属上海松江中心医院感染科/上海交通大学附属第一人民医院松江分院感染科;上海市同济医院消化内科;
【关键词】： 干扰素调节因子 短发夹RNA 腺病毒 病毒包装 RAW.细胞
【基金】：国家自然科学基金(81070357,30660066)
【分类号】：R373
【正文快照】： 干扰素调节因子3(interferon regulator factor 3,IRF3)基因位于19号染色体,由8个外显子和7个内含子组成。其基因长度6.3 kb,编码相对分子质量55 000的蛋白质。IRF3以单体无活性形式组成性Target geneIRF3IRF3IRF3ControlNumberY2145Y2146Y2147Y201si RNA target gene(5′→3，

本文编号：905701