利用融合PCR技术和T载体克隆技术构建结核分枝杆菌PhoPR双组份系统缺失突变载体

发布时间：2017-09-25 07:43

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【摘要】：目的基于融合PCR技术(SOE-PCR)、T载体克隆技术,构建结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)双组份系统缺失突变载体的方法。方法利用SOE-PCR技术,将PhoP、PhoR和PhoPR基因上、下游的同源臂与卡那霉素抗性基因融合,构建PhoP、PhoR和PhoPR突变片段,然后将突变片段直接与T载体连接,将其转入E.coli DH5α感受态细胞并筛选抗性克隆,进而获得MTB PhoP、PhoR和PhoPR缺失突变载体。结果成功构建MTB PhoPR双组份系统缺失突变载体,与传统方法相比,效率高、周期短。结论基于融合PCR技术和T载体克隆技术成功构建MTB PhoPR双组份系统缺失突变载体,为下一步构建MTB突变株以及相关研究奠定基础。
【作者单位】： 石河子大学医学院病原微生物与免疫学教研室/石河子大学《新疆地方与民族高发病》教育部重点实验室/《西部地区高发人兽共患传染性疾病防治》协同创新中心;
【关键词】： 结核分枝杆菌 PhoPR双组份系统 缺失突变株 构建
【基金】：国家自然科学基金项目(No.81260261,81160192) 石河子大学高层次人才启动专项(No.RCZX201446)~~
【分类号】：R378.911
【正文快照】： (Department of Pathogen Biology and Immunology,College of Medicine/Xinjiang Key Laboratory of Endemicand Ethnic Disease/Center of Collaborative Innovation for High Zoonotic Infectious Disease Prevention in WesternRegion of Xinjiang Production and Constru

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