HPV16型E6蛋白单克隆抗体制备及检测

发布时间：2017-09-25 12:05

  本文关键词：HPV16型E6蛋白单克隆抗体制备及检测

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【摘要】：目的制备人乳头瘤状病毒(human papillomavirus,HPV)16型E6蛋白单克隆抗体并对其进行检测。方法 15只Balb-c小鼠分为3组,各5只。设计3条HPV16E6抗原多肽分别对3组小鼠进行免疫,筛选得到对B细胞表位有较高活性的线性多肽HPE601,并用该组的小鼠脾脏制备杂交瘤细胞。采用间接ELISA法对小鼠血清进行阳性克隆筛选和检测抗体效价,采用考马斯亮蓝染色鉴定抗体纯度,采用标准曲线计算抗体浓度,采用Western blot法检测并采用间接免疫荧光法验证纯化E6抗体对Caski、Hela和正常宫颈上皮细胞核蛋白特异性结合情况。行宫颈组织活检患者20例,其中HPV16型宫颈组织7例,HPV18型宫颈组织6例和正常宫颈组织7例,采用免疫荧光法检测单克隆抗体对3种组织的检出率。结果制备得到单克隆抗体Whu001,经鉴定抗体纯度较好,该克隆能特异性识别HPV16型E6蛋白;Whu001对HPV16型组织的检出率(80%)明显高于HPV18型宫颈组织(15%)和正常宫颈组织(0),差异有统计学意义(P0.05)。结论成功筛选出了针对HPV16E6抗原的单克隆抗体,其对HPV16的诊断具有特异性,为在蛋白水平上检测HPV E6蛋白提供了新途径。
【作者单位】： 武汉大学人民医院妇产科;
【关键词】： 单克隆抗体 HPV型E蛋白 Balb-c小鼠
【基金】：国家自然科学基金(81302273) 湖北省卫计委一般面上项目(WJ2015MB084) 湖北省科技厅科技项目支撑计划(2015BCA313)
【分类号】：R392
【正文快照】： 持续性高危型人乳头瘤状病毒(humanpapillomavirus,HPV)感染是宫颈癌发生的主要原因[1]。高致病性HPV中以HPV16和HPV18型常见,其致癌性最强,尤其是HPV16[2]。E6癌蛋白是HPV16型生命周期的主要蛋白之一,其可降解肿瘤抑制因子p53和pRB等,从而抑制细胞凋亡[3-4]。因此,E6和E7被认，

本文编号：917238