不同CHO工程细胞株表达的VEGFR-Fc唾液酸化修饰的研究

发布时间：2017-09-27 07:17

本文关键词：不同CHO工程细胞株表达的VEGFR-Fc唾液酸化修饰的研究

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【摘要】：目的比较中国仓鼠卵巢细胞(CHO)工程细胞株表达的VEGFR-Fc的唾液酸化程度的差异,为CHO工程细胞株的筛选提供参数依据。方法从唾液酸单糖、寡糖链这两个层次分析VEGFR-Fc的唾液酸化程度。唾液酸单糖的定量:酸水解释放出的唾液酸用荧光试剂1,2-diamino-4,5-methylenedioxybenzene(DMB)衍生后,采用荧光-亲水保留液相色谱(HILIC-FLD)检测。寡糖链的结构分析:糖苷酶PNGase F释放出的寡糖链经邻氨基苯甲酰胺(2-AB)衍生后,一部分利用阴离子交换色谱原理分析寡糖链上唾液酸的平均数;一部分经HILIC原理分析VEGFR-Fc寡糖链指纹图谱。结果 6株工程细胞株表达的VEGFR-Fc唾液酸含量在3~12 mol NANA/mol蛋白之间,参考品Aflibercept为10.46 mol NANA/mol蛋白;每个寡糖链的唾液酸平均数在0.28~1.0之间;寡糖链的特征指纹谱图显示VEGFR-Fc有12个共有峰,各样品、参考品均有以上共有峰,但各峰的峰高有差异。结论不同的CHO工程细胞株所表达的糖蛋白的唾液酸化程度存在差异。
【作者单位】：安徽医科大学生物化学与分子生物学教研室;安徽安科生物工程(集团)股份有限公司;
【关键词】： 唾液酸 唾液酸化 糖基化 HILIC-FLD
【分类号】：R3411
【正文快照】： 2016-03-04接收糖蛋白是蛋白质在翻译后经过糖基化修饰形成,被广泛应用于治疗各种疾病,占据着较大的市场。糖基化作为蛋白质翻译后的主要修饰之一,调节并稳定蛋白构象,增加其可溶性,介导受体对蛋白的识别作用,影响蛋白类药物的生物学活性[1-2]。因此,有必要对糖蛋白类生物药物

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