小牛血去蛋白提取物对缺氧模型小鼠能量代谢作用的研究
本文关键词：小牛血去蛋白提取物对缺氧模型小鼠能量代谢作用的研究
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【摘要】：小牛血去蛋白提取物(Deproteinated Extract from Calf Blood,DECB)是从发育旺盛的小牛血清或全血中提取得到的具有生物活性的小分子混合物,其中包括低分子多肽、核苷、氨基酸和寡糖等有机成分和一些无机盐类,它能够提高缺氧组织细胞对血液中氧和葡萄糖的转运及利用,从而加快线粒体的氧化磷酸化进程,为缺氧细胞提供能量,改善细胞能量代谢。该药物临床应用广泛,但其具体的作用机制尚不明确。目的:探讨小牛血去蛋白提取物对小鼠肝脏能量代谢的影响,并且探究该影响作用的相关因子,为临床应用提供理论依据。方法:1、利用软电离法和飞行质谱检测器检测小牛血去蛋白提取物的分子量范围、利用瓦氏呼吸仪测定该药物的呼吸活性。2、通过整体水平实验观察小牛血去蛋白提取对能量代谢的作用,ICR小鼠24只随机分为四组,即空白组(CON)、给药组(CON+DECB)、模型组(M),模型给药组(M+DECB),空白组(CON)和模型组(M)给予蒸馏水饲养5周,给药组(CON+DECB)和模型给药组(M+DECB)连续皮下注射小牛血去蛋白提取物注射液5周,剂量为165mg/kg。末次给药结束1h后,将模型组(M)和模型给药组(M+DECB)分别放置于独立密封磨口玻璃瓶中,使小鼠处于缺氧状态。严重缺氧会导致抽搐,以小鼠出现哮喘式呼吸并伴有轻微抽搐为指征记录小鼠耐缺氧时间。立即眼球取血,并取心脏、大脑、肝脏等组织;测定血清、心脏组织、大脑组织、肝脏组织中葡萄糖的含量;测定心脏、大脑、肝脏组织中的ATP含量;测定血液、肝脏组织、大脑组织中的乳酸含量以及大脑、心脏、肝脏组织中蛋白含量的变化。3、使用STEM软件将筛选得到的显著性差异基因进行聚类分析,然后基于NCBI Gene Ontology数据库对这些基因进行GO注释,并通过DAVID网站对糖脂代谢途径中的基因进行功能分析和生物通路富集分析,最后进行实时定量PCR验证。结果:1、质谱检测结果显示,小牛血去蛋白提取物的分子量分布3000D;其呼吸活性值为:QO2(空白)=2.03,QO2(样品)=5.25,SI=2.59。2、生化检测结果显示:与模型组相比(M),模型给药组(M+DECB)耐缺氧时间显著(P㩳0.05)延长;与空白组相比(CON),给药组(CON+DECB)中葡萄糖的含量显著降低(P㩳0.05),与模型组相比(M),模型给药组(M+DECB)小鼠血糖含量显著降低(P㩳0.01),与空白组(CON)相比,给药组(CON+DECB)心脏组织中和肝脏组织中的糖含量显著升高(P0.05),与模型组(M)相比,模型给药组(M+DECB)小鼠大脑(P0.01)、心脏(P0.05)、肝脏(P0.01)中糖的含量显著升高;小牛血去蛋白提取物可显著降低缺氧小鼠血液、大脑、肝脏中的乳酸含量(P0.01);小牛血去蛋白提取物可以显著提高缺氧小鼠脑、心、肝的ATP含量(P0.01);小牛血去蛋白提取物可以显著增加生理状态下小鼠大脑(P0.05)、心脏(P0.01)、肝脏(P0.01)中的蛋白含量,同时该药物也可以显著增加缺氧模型小鼠心脏(P0.01)、肝脏(P0.01)中蛋白的含量:3、以给药组(CON+DECB)和空白组(CON)为对象进行m RNA表达谱芯片研究,共筛选到1186与能量代谢相关的差异表达基因。其中上调基因495个,占基因总数的41.7%,下调基因691个,占基因总数的58.3%。又通过基因功能聚类分析,糖脂代谢途径中13个基因与能量代谢最为紧密,并选择Hmgcs2、Cpt1a、Angptl4、Cyp8b1、Ehhadh基因进行实时定量PCR验证,这5个基因在空白组(CON)和给药组(CON+DECB)的表达比值分别为0.31、0.24、0.15、0.18、0.25,每个因子相对应的P值是0.016、0.006、0.005、0.027、0.011。结论:1、小牛血去蛋白提取物可以延长缺氧模型小鼠的的耐缺氧时间,改善能量代谢。2、HNGCS2、Cpt1a、Angptl4、Cyp8b1、Ehhadh可能是小牛血去蛋白提取物改善小鼠肝脏能量代谢的5个关键因子。
【关键词】：小牛血去蛋白提取物 能量代谢 耐缺氧 mRNA表达谱芯片
【学位授予单位】：北华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R364.4;R-332
【目录】：
- 摘要5-8
- Abstract8-17
- 第1章 绪论17-27
- 1.1 引言17-18
- 1.2 小牛血去蛋白提取物的研究进展18-24
- 1.2.1 小牛血去蛋白提取物制备工艺的研究进展18-19
- 1.2.2 小牛血去蛋白提取物活性成分的研究进展19-20
- 1.2.3 小牛血去蛋白提取物活性测定方法的改进20-22
- 1.2.4 小牛血去蛋白提取物药物剂型的研究进展22-23
- 1.2.5 应用前景及存在问题23-24
- 1.3 基因芯片技术与应用24-27
- 1.3.1 浅谈基因芯片技术24-25
- 1.3.2 基因芯片在药学领域应用现状25-27
- 第2章 材料和仪器27-30
- 2.1 实验动物27
- 2.2 实验试剂与试药27-28
- 2.3 实验仪器28-30
- 第3章 小牛血去蛋白提取物注射液理化性质的研究30-37
- 3.1 实验方法30-33
- 3.1.1 药物总固体含量的测定30
- 3.1.2 利用高效液相色谱仪进行药物定性分析30-31
- 3.1.3 对药物分子量的分析确定31
- 3.1.4 对药物活性的测定31-33
- 3.2 实验结果33-35
- 3.2.1 小牛血去蛋白提取物注射液的总固体含量33
- 3.2.2 HPLC测定结果33-34
- 3.2.3 MS测定结果34-35
- 3.2.4 呼吸活力指数35
- 3.3 讨论35-37
- 第4章 小牛血去蛋白提取物注射液对缺氧模型小鼠的作用37-55
- 4.1 实验方法37-41
- 4.1.1 给药与饲养37
- 4.1.2 建立动物模型37-38
- 4.1.3 取材38
- 4.1.4 组织中生化指标的检测38-40
- 4.1.5 数据分析40-41
- 4.2 实验结果41-51
- 4.2.1 小牛血去蛋白提取物注射液对小鼠耐缺氧时间的影响41-42
- 4.2.2 小牛血去蛋白提取物注射液对小鼠血糖的影响42-43
- 4.2.3 小牛血去蛋白提取物注射液对小鼠大脑、心脏、肝脏组织中糖含量的影响43-44
- 4.2.4 小牛血去蛋白提取物对小鼠血清中乳酸含量的影响44-46
- 4.2.5 小牛血去蛋白提取物注射液对急性缺氧小鼠大脑、肝脏组织中乳酸含量的影响46-47
- 4.2.6 小牛血去蛋白提取物注射液对小鼠大脑、心脏、肝脏组织中ATP含量的影响47-49
- 4.2.7 小牛血去蛋白提取物注射液对小鼠大脑、心脏、肝脏组织中蛋白含量的影响49-51
- 4.3 讨论51-55
- 第5章 基于mRNA表达谱芯片对小牛血去蛋白提取物改善小鼠能量代谢相关因子的研究55-74
- 5.1 实验方法56-62
- 5.1.1 RNA提取56-57
- 5.1.2 RNA质量检测57-58
- 5.1.3 样品标记和杂交58
- 5.1.4 数据采集和标准化58-59
- 5.1.5 差异表达基因分析和功能聚类分析59
- 5.1.6 Real time PCR验证59-62
- 5.1.7 数据分析62
- 5.2 实验结果62-69
- 5.2.1 RNA质量检测结果62
- 5.2.2 RNA的完整性检测和变性琼脂糖凝胶电泳gDNA污染试验结果62-63
- 5.2.3 芯片杂交结果63-65
- 5.2.4 基因功能聚类结果65-68
- 5.2.5 Real Time PCR验证结果68-69
- 5.3 讨论69-74
- 结论74-75
- 参考文献75-83
- 作者简介及科研成果83-85
- 致谢85
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本文编号：930965
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