多巴胺经D2类受体抑制脂多糖诱导小鼠腹腔巨噬细胞的炎症反应

发布时间：2017-09-28 16:37

  本文关键词：多巴胺经D2类受体抑制脂多糖诱导小鼠腹腔巨噬细胞的炎症反应

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【摘要】：目的探索多巴胺及多巴胺受体在脂多糖(LPS)诱导的小鼠腹腔巨噬细胞相关炎症中的作用及机制。方法1腹腔注射巯基乙酸盐肉汤后四天后,获取C57野生型(TLR4~(+/+))小鼠原代腹腔巨噬细胞进行研究,多巴胺分别以不同浓度(10~(-6),10~(-5),10~(-4) mol/L)和时间(0.5,1,2 h)预处理小鼠原代腹腔巨噬细胞后,1μg/ml LPS作用细胞6 h。运用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测细胞培养上清中TNF-α浓度,Western-blot检测TLR4、pro-IL-1β的表达,CCK8检测细胞活力,筛选多巴胺抑炎的最佳浓度和时间。2小鼠原代腹腔巨噬细胞按如下分组处理:对照组(正常培养基培养细胞)、LPS刺激组(1μg/ml LPS刺激6 h)、多巴预处理组(多巴胺预处理后1μg/ml LPS刺激6h)、多巴胺受体拮抗剂组(多巴胺D1类或D2类受体拮抗剂预处理后,再加入多巴胺及LPS)、多巴受体激动剂组(多巴D1类受体或D2类受体激动剂预处理后加入LPS)。运用ELISA检测细胞培养上清中TNF-α浓度,Western-blot检测TLR4、pro-IL-1β的表达。3原代培养野生型(TLR4~(+/+))和TLR4基因缺失(TLR4~(-/-))小鼠腹腔巨噬细胞,分别按如下分组处理:对照组(正常培养基培养细胞)、lps刺激组(1μg/mllps刺激6h)、多巴胺预处理组(多巴胺预处理后1μg/mllps刺激6h)。运用elisa检测细胞培养上清中tnf-α浓度,western-blot检测tlr4、pro-il-1β的表达。结果1elisa和western-blot结果显示,与lps刺激组相比,10-4mol/l多巴胺预处理小鼠腹腔巨噬细胞2h能够有效抑制lps诱导的tnf-α、tlr4、pro-il-1β表达(p0.05),cck-8结果显示各组细胞活力无差异(p0.05)。2与多巴预处理组相比,多巴胺d2类受体拮抗剂可减弱多巴胺对lps诱导的tnf-α、tlr4、pro-il-1β表达的抑制作用(p0.05),而多巴胺d1类受体拮抗剂则无此作用;相反,与lps刺激组相比,多巴胺d2类受体激动剂抑制了tnf-α的表达(p0.05),而多巴胺d1类受体激动剂则对tnf-α的表达无影响。3与各自lps刺激组相比,多巴胺预处理能减少tlr4+/+小鼠腹腔巨噬细胞tnf-α的分泌及pro-il-1β的表达(p0.05),而多巴胺预处理对tlr4-/-小鼠腹腔巨噬细胞tnf-α的分泌及pro-il-1β的表达无明显抑制作用(p0.05)。结论1.多巴胺能够抑制lps诱导的小鼠腹腔巨噬细胞诱导的tnf-α的分泌和pro-il-1β的表达,且该作用不是通过抑制细胞活力产生的。2.多巴胺通过激活多巴胺d2类受体抑制lps诱导的相关炎症反应。3.多巴胺抑制LPS诱导的炎症反应,依赖于TLR4。
【关键词】：多巴胺 炎症反应 巨噬细胞 多巴胺D2类受体 Toll样受体4
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R392
【目录】：

• 英汉缩略语名词对照4-5
• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-11
• 前言11-13
• 1 实验材料13-15
• 2 实验方法15-20
• 3 实验结果20-25
• 4 讨论25-28
• 全文总结28-29
• 参考文献29-32
• 文献综述一32-39
• 参考文献35-39
• 文献综述二39-48
• 参考文献44-48
• 致谢48-49
• 攻读硕士学位期间发表的学术论文49

【参考文献】

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1 Agata Mulak;Bruno Bonaz;;Brain-gut-microbiota axis in Parkinson's disease[J];World Journal of Gastroenterology;2015年37期

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本文编号：936980