重组人白细胞介素-13在大肠杆菌中的表达纯化及鉴定

发布时间：2017-09-29 11:25

  本文关键词：重组人白细胞介素-13在大肠杆菌中的表达纯化及鉴定

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【摘要】：采用大肠杆菌(Escherichia coli)作为宿主,通过300L发酵罐进行中试发酵表达重组人白细胞介素-13(rhIL-13)融合蛋白;经异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导,离心发酵液收集菌体,菌体经溶解、变性、稀释复性及亲和层析捕获,获得融合蛋白;融合蛋白经肠激酶酶切后,再经亲和层析分离和分子筛精细纯化等步骤,获得高纯度rhIL-13原液.每升发酵液可获得高纯度的rhIL-13原液约30mg.通过本纯化工艺获得的rhIL-13原液经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)法检测,纯度大于98.75%;经高效液相色谱分子排阻(HPLC-SEC)法检测,纯度为100%;质谱(MS)法测定rhIL-13分子质量为12 348u,与理论值基本一致;采用噻唑蓝(MTT)法进行比活性检测,比活大于8.0×106 IU/mg;采用HPLC-SEC法和MS法对rhIL-13二硫键数目和位置进行分析,结果显示二硫键数目和位置与理论一致.此操作方法可获得高纯度、高活性的rhIL-13原液,并且操作简单,易于放大,可实现工业化规模生产.
【作者单位】： 厦门大学生命科学学院;厦门特宝生物工程股份有限公司;
【关键词】： 重组人白细胞介素-(rhIL-) 表达 纯化 鉴定
【基金】：国家高技术研究发展计划(863)项目(2007AA021604)
【分类号】：R378.2
【正文快照】： 白细胞介素-13(IL-13)是一种多功能细胞因子,主要由T细胞、嗜碱粒细胞、浆细胞及树突状细胞等,尤其是Ⅱ型辅助性T细胞(Th2)在活化状态下分泌产生[1].IL-13的主要功能包括:诱导单核细胞分化,增强主要组织相容性复合体(MHC)Ⅱ类分子的表达[2];抑制脂多糖诱导的单核因子分泌,控制，

本文编号：941735