抗IL-33全人源scFv-Fc抗体的可溶性表达与鉴定

发布时间：2017-09-30 21:03

  本文关键词：抗IL-33全人源scFv-Fc抗体的可溶性表达与鉴定

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【摘要】：通过对通用型在细菌中可溶性表达scFv-Fc抗体载体的构建,对抗IL-33全人源scFv-Fc抗体进行可溶性表达并鉴定。扩增人IgG1Fc片段及前期筛选的抗IL-33单链抗体(scFv)DNA,分别插入到改建的载体pLZ16中,构建可溶性重组表达pLZ16-scFv-Fc质粒。将重组质粒转入E.coli DH5αF’,菌落经PCR和测序验证表明我们成功构建了pLZ16-scFv-Fc重组质粒。将阳性克隆子分别于32℃IPTG表达5h或25℃无IPTG表达50h,用HRP标记抗人IgG1Fc抗体进行检测,结果显示25℃无IPTG表达50h时,表达蛋白分泌在细菌周质间,可明显检测到scFv-Fc的可溶性表达;western blotting结果显示,25℃无IPTG表达的scFv-Fc为65kD左右,其可溶性表达量较32℃表达量高。本研究成功构建了pLZ16-scFv-Fc重组质粒,并在E.coli DH5αF’中成功可溶性表达抗IL-33全人源scFv-Fc抗体。
【作者单位】： 西南医科大学基础医学院;
【关键词】： scFv-Fc IL- 可溶性表达
【基金】：四川省科技厅项目(2015JY0218;013SZZ005) 四川省教育厅项目(15ZA0157;16TD0022)
【分类号】：R392
【正文快照】： 2005年,自Schmitz等发现IL-33以后,引起了人们对IL-33研究的热潮。IL-33是IL-1家族新成员,是ST2受体的特异性配体,主要参与调节Th2型免疫应答与炎症反应,在过敏性疾病和自身免疫性疾病中发挥着至关重要的作用。IL-33可刺激Th2细胞的分化,诱导Th2细胞向淋巴结和组织中募集[1];I

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本文编号：950373