淋巴细胞中ZBTB24的功能研究

发布时间：2017-10-04 16:28

  本文关键词：淋巴细胞中ZBTB24的功能研究

  更多相关文章： ZBTB24 免疫缺陷 着丝粒不稳定 面部表情异常 IRF4 Blimp-1 细胞周期

【摘要】：ZBTB24的功能性缺失突变导致了一种先天性免疫缺陷疾病ICF2(免疫缺陷,着丝粒不稳定和面部表情异常综合症2)。ICF2的主要免疫学特点是血清中的抗体滴度和记忆性B细胞数目的显著下降,但总B细胞的数量没有明显变化。ZBTB24属于ZBTB的蛋白大家族,同家族的其他成员像BCL6等在B细胞的发育和功能中有关键的作用。根据ICF2病人的这些表型以及我们前期研究所发现的ZBTB24在B细胞中的高表达水平,我们推测ZBTB24主要通过影响B细胞的功能而参与了体内的抗体产生过程。因此,在本论文中我们主要以人的B淋巴瘤细胞为工具细胞来探讨ZBTB24的生物学功能。我们在Raji/Daudi细胞中用特异性的shRNAs下调内源性ZBTB24的表达水平进而显著抑制了细胞增殖,这主要是通过抑制细胞周期(阻滞在G0/1期)而实现的,因其对细胞凋亡无明显影响。下调ZBTB24促进了IRF-4和Blimp-1的表达,而这两个基因在B细胞的增殖及分化为抗体分泌细胞等方面都有很重要的作用。用shRNA来阻止ZBTB24下调所导致的IRF-4表达水平的上调逆转了ZBTB24下调对细胞增殖的抑制作用,说明ZBTB24主要是通过调控IRF-4的表达水平而影响细胞的增殖能力。我们的实验结果还提示ZBTB24对IRF-4表达水平及B细胞增殖能力的调控不依赖于BCL-6,因为其不影响BCL-6的表达水平和转录活性。在T淋巴瘤细胞Jurkat中,我们发现下调ZBTB24也抑制了细胞增殖,但对IRF-4的表达无影响。这些数据说明淋巴细胞中ZBTB24通过不同的机制影响的细胞的增殖、分化能力。总的来说,本论文中的实验结果不仅为ZBTB24突变的ICF2病人中B细胞和抗体缺陷的现象提供了一个分子机制,同时也提示ZBTB24是对B细胞功能很重要的一个转录因子。
【关键词】：ZBTB24 免疫缺陷 着丝粒不稳定 面部表情异常 IRF4 Blimp-1 细胞周期
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R392
【目录】：

• 中文摘要4-5
• Abstract5-9
• 第一章 前言9-13
• 第二章 材料与方法13-23
• 2.1 实验材料13-16
• 2.1.1 试剂13
• 2.1.2 蛋白与抗体13-14
• 2.1.3 质粒构建，shRNA以及病毒包装14
• 2.1.4 检测试剂盒14
• 2.1.5 引物14-15
• 2.1.6 原代细胞以及细胞株15
• 2.1.7 仪器设备与耗材15-16
• 2.2 实验方法16-23
• 2.2.1 SDS-PAGE16
• 2.2.2 Western Blot16-17
• 2.2.3 免疫共沉淀17
• 2.2.4 细胞增殖实验17
• 2.2.5 RNA提取17-18
• 2.2.6 RNA逆转录为cDNA18-19
• 2.2.7 Real-time PCR19
• 2.2.8 流式细胞染色19
• 2.2.9 流式分选19
• 2.2.10 BCA法测蛋白浓度19-20
• 2.2.11 激光共聚焦显微技术20
• 2.2.12 胞内染色20-21
• 2.2.13 siRNA转染细胞21
• 2.2.14 慢病毒感染细胞21
• 2.2.15 细胞周期实验21-22
• 2.2.16 细胞凋亡实验22
• 2.2.17 数据分析22-23
• 第三章 ZBTB24在细胞中的定位以及siRNA的筛选23-25
• 3.1 ZBTB24在细胞中的定位23
• 3.2 筛选下调ZBTB24的siRNA23-24
• 3.3 本章讨论24-25
• 第四章 ZBTB24在B细胞株中的作用25-38
• 4.1 含ZBTB24特异性shRNA的病毒包装及下调效果25-26
• 4.2 在B细胞株中下调ZBTB24显著抑制了细胞的增殖26-28
• 4.3 在Raji细胞中下调ZBTB24对细胞凋亡无显著影响28-29
• 4.4 ZBTB24表达的下调抑制了细胞周期G0/1 到S期的转换29
• 4.5 在Raji细胞中下调ZBTB24上调了IRF-4 以及Blimp-1 的表达29-30
• 4.6 阻止IRF-4 表达水平的上调逆转了ZBTB24低表达Raji细胞增殖能力的缺陷30-31
• 4.7 下调ZBTB24对Raji细胞中CD38和CD138的表达无影响31-32
• 4.8 ZBTB24对BCL6的表达和转录活性无影响32-33
• 4.9 ZBTB24与其他ICF综合症相关基因的关系33-34
• 4.10 在Raji细胞中过表达ZBTB24对细胞周期没有影响34-35
• 4.11 本章讨论35-38
• 第五章 ZBTB24在T细胞株中的作用38-43
• 5.1 ZBTB24在Jurkat细胞细胞的下调效果38-39
• 5.2 下调ZBTB24对Jurkat细胞增殖有抑制作用39
• 5.3 ZBTB24下调对Jurkat细胞的细胞周期的没有影响39-40
• 5.4 在Jurkat细胞中ZBTB24下调对IRF-4 的表达没有影响40-41
• 5.5 本章讨论41-43
• 文献综述43-51
• 参考文献51-59
• 英文缩略词59-60
• 致谢60-62
• 个人简历62-63

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