肺炎支原体铁吸收调节蛋白基因的克隆表达与纯化

发布时间：2017-10-09 10:43

  本文关键词：肺炎支原体铁吸收调节蛋白基因的克隆表达与纯化

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【摘要】：[目的]克隆肺炎支原体铁吸收调节蛋白(Fur)基因并纯化Fur蛋白,为研究其生物学功能奠定基础。[方法]利用Clustal Omega分析肺炎支原体Fur蛋白及其同源序列并用MEGA6.0构建进化树,通过PCR扩增Fur基因并对其进行双酶切,然后连接到p ET28a,得到重组载体p ET28a-Fur,将其转化大肠杆菌BL21(DE3),利用IPTG诱导Fur蛋白表达,并通过亲和层析纯化Fur蛋白。[结果]多序列比对和进化树分析表明Mp含有一个Fur蛋白。克隆得到大小为477 bp的Fur基因,编码159个氨基酸。得到重组表达质粒p ET28a-Fur,该质粒能在大肠杆菌中能高效表达,并纯化得到重组Fur蛋白。[结论]成功克隆获得Mp Fur基因,在大肠杆菌中高效表达并获得高纯度Fur蛋白。
【作者单位】： 邵阳医学高等专科学校;南华大学病原生物学研究所特殊病原体防控湖南省重点实验室;
【关键词】： 肺炎支原体 Fur蛋白 克隆 表达
【基金】：湖南省科技计划项目(“次抑菌浓度的大环内酯药物诱导Mp交叉耐药的机制研究”;No.2013FJ3067) 特殊病原体防控湖南省重点实验室资助项目(湘科计字[2014]10号)
【分类号】：R378;Q78
【正文快照】： 铁是细菌在生存和生长过程中必需的金属元素之一,它参与了细菌的电子传递、DNA合成和氧的运输等各种生理和生化过程[1]。但是细菌胞内高浓度的铁离子会导致细菌内的氧化失衡,细菌必须具备一定机制用来维持细菌体内的铁离子平衡[1-2]。铁吸收调节蛋白(ferric uptake regulator

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1 宋志强;李媛;孙文静;刘洋;邹晓辉;陈维;周玉梅;辛九庆;;牛支原体新基因(P18)的克隆表达及活性鉴定[J];中国预防兽医学报;2012年03期

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本文编号：999733