脂肪干细胞联合血管内皮细胞修复兔尿道缺损的实验研究

发布时间：2017-04-03 00:21

  本文关键词：脂肪干细胞联合血管内皮细胞修复兔尿道缺损的实验研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：研究背景先天性尿道下裂、尿道损伤、尿道狭窄等是泌尿外科常见疾病,其有效解决办法仍然依赖于外科手术治疗,而尿道成形及重建术是主要的治疗方式。尿道成形术及重建术种类较多,目前将近有300余种,并且众多学者和医学工作者还一直在对其进行改良和创新。然而,对于长段尿道缺损、尿道狭窄及复杂型尿道损伤的患者而言,术后出现尿瘘、尿道狭窄等并发症的情况还仍然较高,成为令泌尿外科医师颇为头疼的问题。相关研究表明,术后尿道的血液供应情况与上述并发症的发生也存在的一定的联系。随着组织工程技术和干细胞技术的发展,理想的尿道修复支架材料和良好的种子细胞在基础研究及临床上取得了令人满意的成果。脂肪干细胞(Adipose derived stem cell,ADSCs)来源较广泛、取材方便、再生能力较强且具有向骨组织、软骨组织、心肌组织及上皮组织分化的潜能等优点,使其在组织工程领域种子细胞的研究中逐渐成为众多研究者研究的热点。同时,血管内皮细胞(Vascular endothelial cell,VEC)是一种多功能的细胞,位于血管内壁,许多机体的发病过程均有其参与。大量动物实验及临床资料表明,VEC在改善机体缺血部位和损伤部位的血供方面有着得天独厚的优势。近年来,ADSCs和VEC分别单独联合支架材料用来修复尿道的研究报道逐渐增多,且取得了一定的成果。然而“脂肪干细胞联合血管内皮细胞修复兔尿道缺损”的文献尚未见报道。研究目的探讨应用“脂肪干细胞(ADSCs)和血管内皮细胞(VEC)体外共培养,联合脱细胞基质材料构建人工尿道”修复兔尿道缺损的效果。方法1.种子细胞的获取1.1体外分离、培养、扩增兔脂肪干细胞,并利用流式细胞仪进行鉴定;1.2血管内皮细胞的提取、培养及鉴定;1.3 ADSCs与VEC进行共培养。2.分别将ADSCs、VEC以及二者共培养细胞分别与脱细胞基质结合,构建组织工程化尿道。3.将60只雄性成年新西兰兔随机数字法分为5组,分别将其阴茎腹侧尿道制作成缺损长度为2.0cm的动物模型。A组(无细胞对照组)即:单纯应用异种脱细胞基质修复组。B组(假手术组)即:尿道缺损模型制作成功后,将尿道缺损后的两个尿道断端直接行端端吻合;C组(ADSCs组)即:脂肪干细胞复合异种脱细胞基质手术修复组;D组(VEC组)即:血管内皮细胞复合脱细胞基质手术修复组;E组(ADSCs与VEC共培养组)即:ADSCs与VEC共培养后复合异种脱细胞基质手术修复组。4.术后于第1W、2W、4W、12W分别取A、B、C、D、E组实验动物的重建尿道组织,行组织学及免疫组化观察分析。5.术后12W时分别对各组实验动物行逆行尿道造影及尿动力学检查。结果1.体外培养、扩增的ADSCs为梭形。应用流式细胞仪检测表型CD44、CD105阳性,而CD34阴性,符合间充质干细胞特征;VEC原代细胞呈贴壁生长,细胞形态多样,圆形、椭圆形、长梭形或多角形,传代内皮呈铺路石样;共培养细胞7天时部分细胞仍保留原有的梭形,另外一部分细胞形态不同于前者,可呈多角形,巢样分布,14天时观察可见细胞间存在许多相互连接的突触,并且部分细胞可融合成团块状;2.E组检测尿路上皮血管内皮细胞因子(FⅧ)、平滑肌肌动蛋白(a-SMA)均为阳性,与脱细胞基质复合均生长良好。3.术后1W、2W、4W、12W时分别对各组兔子尿道行组织学观察,可见E组毛细血管数目及平滑肌明显多于C、D组;4.统计学结果显示C、D、E三组和A组相比术后出现并发症的几率低;而C、D、E三组之间相比术后并发症发生率则无明显差异。结论1.ADSCs和VEC经体外共培养后可作为种子细胞应用于组织工程化尿道的构建和长段尿道缺损的修复。2.VEC可支持ADSCs向尿道上皮方向的转变,并且还可以加快血管的发生;
【关键词】：脂肪干细胞(ADSCs) 血管内皮细胞(VEC) 共培养 脱细胞基质 尿道组织工程 尿道重建
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R726.9
【目录】：

• 摘要4-7
• ABSTRACTS7-12
• 中英文对照缩略词12-13
• 前言13-15
• 材料及方法15-22
• 结果22-25
• 讨论25-29
• 结论29-30
• 附图30-34
• 参考文献34-37
• 综述 组织工程的研究进展及其在尿道重建中的应用37-59
• 参考文献54-59
• 个人简历及攻读硕士期间发表的论文59-60
• 致谢60

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本文编号：283414